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实验问答

23,965,902 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问WB中Tween-20dl的作用是什么呢？仅仅是复苏抗原吗？如果是复苏抗原，他又是怎么实现抗原复苏的呢

balalaLy

tween20就好像是洗洁精，可以洗掉膜上的杂质

6 回答762 围观

问蛋白质组学中质谱结果蛋白筛选问题？

此用户已注销

蛋白质筛选的方法有很多种,其中最常用的是亲和层析法。这种方法利用蛋白质与其特定配体之间的亲和力,将目标蛋白质从混合物中分离出来。例如,如果我们想筛选出一种与某种药物结合的蛋白质,我们可以将药物固定在亲和树脂上,然后将混合物通过亲和树脂柱,药物与其结合的蛋白质就会被捕获下来。除了亲和层析法,还有许多其他的蛋白质筛选方法,如蛋白质芯片技术、蛋白质工程等。这些方法都有其独特的优点和适用范围,可以根据具体

6 回答1175 围观

问核质分离定位和 confocol 定位哪个可信度更高？

huarenqiang5

在其他条件相同的情况下核质分离定位的可信度要高些。

3 回答693 围观

问蛋白质样本保存问题求助？

feixue7758527w

原则上低温保存或者液氮保存是可以长久保存的，不会对实验有什么影响的。如果只是常温保存，估计也就是一两个小时的。尽快最好的。

6 回答1091 围观

问蛋白质组学中蛋白质谱鉴定的问题求助？？

qzming65

如果没有合适数据库导致鉴定效果差，可以通过更换范围更大的数据库、近源物种数据库，或采用相关研究物种的蛋白、EST数据库等构建本地数据库的方式解决

5 回答314 围观

问GST tag的特异性高吗？

于小鱼鱼1998

提高gst目的蛋白的浓度，二者存在竞争关系，提高浓度就可以提高竞争力

3 回答361 围观

问请问，WB中一抗是如何取代封闭液的，一抗与二抗的结合又是通过怎么样进行的，是通过抗原决定簇与互补决定区吗？

此用户已注销

利用一抗和二抗来检测目标蛋白质。一抗是指特异性结合目标蛋白质的抗体,二抗是指特异性结合一抗的抗体。通过这种方式,可以检测出目标蛋白质的存在和表达水平。

4 回答1310 围观

问请问大家，抗体的互补决定区与抗原决定簇是如何决定抗原-抗体结合特异性的？

loveliufudan

抗体与抗原的特异性结合是通过抗体的互补决定区(CDR)与抗原的抗原决定簇(epitope)之间的互补性实现的。抗原决定簇是抗原分子表面特异性三维结构,是抗体识别的位点。抗体分子通过其互补决定区与抗原决定簇进行高度互补的空间结合,就像钥匙与锁孔的契合。互补决定区一般由6个CDR组成,3个在轻链(CDR-L1,CDR-L2,CDR-L3),3个在重链(CDR-H1,CDR-H2,CDR-H3)。这6个

4 回答1061 围观

问SYBR GReen I和PI染色显微镜制片详细操作过程

loveliufudan

SYBR Green染色是一种常用的核酸荧光染色方法,与HE染色不同,它通过与双链DNA特异性结合来探测细胞中的DNA。SYBR Green染色细胞制片的详细操作流程如下:1. 取待检细胞,制备细胞爬片,固定于载玻片上。常用4%多聚甲醛固定10-15分钟。2. 用PBS缓冲液洗涤2次,每次5分钟。3. 在无光条件下,加入适量含有SYBR Green 的染色液(商品SYBR Green可直接稀释使用

4 回答2084 围观

问血球计数板计数细胞为什么那个格子这么模糊是我操作方法不对吗还是本来就是这么模糊

huarenqiang5

主要考虑以下几点:1.染液保存时间过长。2.操作不当。3.细胞原因导致。

6 回答2551 围观

问提取组织线粒体做western

土井挞克树

操作步骤：1.提取线粒体后，蛋白定量，与线粒体保存介质（主要成分蔗糖、Tris）混匀-20度冻存。2.将分装线粒体取出融化后，加上样缓冲液混匀。3.100度水浴5分钟，取出立即置于冰上。上样，每孔150微克蛋白。4.5%浓缩胶，80伏电压，12%分离胶，110伏电压跑电泳。

3 回答2738 围观

问f4/80+以及ly6G+双阳性的是什么细胞？

sswei

f4/80+以及ly6G+双阳性的是单核巨噬细胞。

4 回答8636 围观

问为什么石蜡切片在展片的时候组织总是展不平？

此用户已注销

要注意石蜡切片是否完全干燥，否则展开时会出现不均匀的情况；同时，在制作展片板时，要将切片放置在正中央，并避免空气泡的存在，石蜡切片的厚度影响展片效果、温度和湿度都有影响

6 回答1329 围观

问Percoll从肾脏组织中分离免疫细胞，什么比例和离心速度合适？

sswei

整个梯度离心要求慢升慢降，需要在离心机里设置加速度，一般有 1 到 9 级可选。Percoll 升降都要 3 的加速度。从1.02-1.3 g/ml范围内的密度梯度离心分离

5 回答953 围观

问尼氏染色的为什么会花片，像是有水渍或者没染匀

伊莉莎白薯

有可能是组织取出以后固定慢了。

5 回答429 围观

问用乙醇回流提取和超声提取过滤后都要进行冻干才能上液相嘛

sswei

用乙醇回流提取和超声提取过滤后都要进行冻干才能上液相

5 回答295 围观

问大家跑过pmd19-t的载体吗，其中有一个control片段，我连接后直接跑凝胶，为啥那么歪歪扭扭，而且位置不对（第二泳道）

loveliufudan

PMD19-T载体中的Control片段可能跑凝胶时位置不正常的原因包括:1. 控制DNA片段质量不好。可能在提取、储存过程中降解或污染,导致其在凝胶电泳中迁移位置不正常。2. DNA上样量不准确。上样量过多会使DNA在凝胶中迁移变形。应准确计量上样量。3. 凝胶浓度不适合。如果凝胶浓度过低,DNA片段易于变形。应选用适合DNA大小的凝胶浓度。4. 电泳电压设置不当。电压过高会产生过热,影响DNA

3 回答575 围观

问玻璃培养皿灭菌的标准操作是什么

此用户已注销

1培养皿洗净后应烘干或晾干，之后按每5-7套用牛皮纸或报纸包好，也可装载大饭盒或特制的盒内，即可进行灭菌。2/6移液管洗净后也应烘干或晾干，在口吸的一端用尖头慑子或针塞人少许脱脂棉花，以防菌体吸人口中或口中的微生物吹人吸管而进人培养基内造成污染。3/6塞棉花要适量（长约1cm，松紧适度），塞好后用酒精灯火焰将外露在管口的棉花烧除，然后用4-5cm的报纸条，以45°角螺旋形将每根移液管分别卷好（需

3 回答1108 围观

问蛋白组学的国内外研究进展

loveliufudan

蛋白组学的研究进展可概括如下:1. 蛋白质组分离技术取得长足进展,如双向电泳、液相色谱、质谱技术等,可以进行高通量和高灵敏度的蛋白质分析。2. 蛋白质组数据库的建立,如Swiss-Prot数据库,收集了大量蛋白质序列和结构信息。3. 蛋白质组Modification的研究,揭示了翻译后修饰的重要性。4. 蛋白质相互作用研究取得进展,如酵母双杂交系统可以高通量检测蛋白间的结合。5. 蛋白质组学与基因

4 回答550 围观

问Trizol法提取DNA，A260/280应该在哪个范围比较好？提取的浓度一般是多少

煮栗了

1.8和2.1之前其实都可以的

6 回答6695 围观

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