• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        噬菌体展示技术制备抗体的实验流程有吗?

        相关实验:筛选 、分离和鉴定用于配体指导基因传递的靶向肽

        user-title

        风景独好-2008

        wx-share
        分享

        6 个回答

        user-title

        qzming65

        有帮助

        噬菌体展示技术制备抗体的过程主要包括以下几个步骤:

        步骤一:构建噬菌体抗体库

        噬菌体抗体库是采用噬菌体展示技术制备抗体的关键。首先,从免疫动物中收集B细胞,并提取其RNA,得到抗体基因的mRNA。然后,通过逆转录酶将mRNA转录成cDNA,再采用PCR方法扩增出抗体基因的编码序列。最后,将扩增得到的抗体基因片段与噬菌体表面展示蛋白基因(如pIII、pVIII等)融合,并转化到相应的宿主细胞中。宿主细胞在适当条件下进行培养,噬菌体抗体库就构建完成了。

        步骤二:筛选抗原

        抗原是制备抗体重要组成部分,应根据实验需要和目标疾病的特性选择。抗原可以是蛋白质、多肽、糖类、药物等。在噬菌体展示技术制备抗体中,抗原通常是一段具有代表性的抗原肽或蛋白,如人类细胞因子、肿瘤标志物等。

        步骤三:对抗原进行选择性识别


        抗体是在B细胞刺激后产生的,具有高度的特异性,能够识别并结合特定的抗原。利用噬菌体展示技术制备抗体时,首先将噬菌体抗体库与抗原进行混合,快速搅拌均匀后,使其自由结合。然后,通过洗涤的方式去除未被结合的噬菌体,保留与抗原结合的噬菌体。这些特异性噬菌体,经纯化后可用于后续的检测和应用。

        步骤四:鉴定和验证抗体特性

        为了验证制备的抗体能否特异性识别和结合目标抗原,通常会采用ELISA、Western blot等方法进行鉴定和验证。同时,还可以通过流式细胞术、免疫组化、免疫荧光等技术进一步验证其特性和生物学活性。制备出的抗体可以应用于分子诊断、分子治疗以及基础科学研究等领域。

        user-title

        小小翻车鱼

        有帮助

        噬菌体展示技术是一种利用噬菌体载体展示蛋白质或肽段的方法,从而筛选出具有特定结合能力的抗体。以下是一个简化的噬菌体展示技术制备抗体的实验流程:


        1. 目标抗原蛋白的合成和纯化:根据目的基因序列合成抗原蛋白,并通过适当的纯化方法获得纯化的抗原蛋白。


        2. 噬菌体载体的构建:将目标抗原蛋白基因插入到噬菌体载体的适当位点,构建重组噬菌体。


        3. 噬菌体展示文库的构建:将重组噬菌体转染到细菌中,并利用细菌进行噬菌体展示文库的扩增。


        4. 噬菌体展示文库的筛选:将噬菌体展示文库与目标抗原蛋白进行亲和性筛选,富集能与抗原蛋白结合的噬菌体。


        5. 阳性克隆的扩增和鉴定:对筛选得到的阳性克隆进行扩增和鉴定,以确定其结合特异性和亲和力。


        6. 抗体基因的扩增和表达:将阳性克隆中的抗体基因扩增出来,并将其转入适当的表达系统中,获得抗体蛋白。


        7. 抗体蛋白的纯化和鉴定:对表达得到的抗体蛋白进行纯化和鉴定,以确定其结构和功能。


        8. 抗体的应用和开发:将制备好的抗体应用于各种生物学实验和临床诊断等领域。


        需要注意的是,具体的实验流程可能因实验材料和实验条件而异,以上流程仅作为一个参考。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        步骤1:构建噬菌体展示库


        重组DNA技术用于将外来cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中,使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面,而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库,如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。


        步骤2:结合


        这些库暴露于选定的目标,只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体,如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。


        步骤3:洗涤


        未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走,只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。


        步骤4:洗脱


        洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体


        步骤5:放大


        展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增,或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        一般来说,噬菌体展示技术有以下5个步骤:


        步骤1:构建噬菌体展示库


        重组DNA技术用于将外来cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中,使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面,而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库,如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。


        步骤2:结合


        这些库暴露于选定的目标,只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体,如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。


        步骤3:洗涤


        未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走,只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。


        步骤4:洗脱


        洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体


        步骤5:放大


        展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增,或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        步骤1:构建噬菌体展示库

        重组DNA技术用于将外来cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因组被插入到多个噬菌体的基因组中。剪接到一个外壳蛋白的基因中,使该蛋白显示在噬菌体颗粒的外面,而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库,如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。

        步骤2:结合

        这些库暴露于选定的目标,只有一些噬菌体会与目标相互作用。这些目标是计划识别特定的配体,如固定的蛋白、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白。

        步骤3:洗涤

        未结合的噬菌体可以被洗涤缓冲液冲走,只留下那些对受体有亲和力的噬菌体。

        步骤4:洗脱

        洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体

        步骤5:放大

        展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增,或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        ①从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞,提取mRNA并反转录为cDNA;

        ②应用抗体轻链和重链引物,根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段;

        ③构建噬菌体载体。噬菌体抗体库载体有入噬菌体、丝状噬菌体和噬菌粒三种,其中后二者是构建表面表达的噬菌体抗体库(surfacedisplayantibody library)常用载体;

        ④表达载体转化细菌,构建全套抗体库。通过多轮的抗原亲和吸附—洗脱—扩增,最终筛选出抗原特异的抗体克隆。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序