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科研学霸天团,48小时有问必答
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肺癌 A549 为什么细胞不贴壁了?
SHINING579
除了以上说的,还可能是培养瓶的问题,以前找别人买贴壁细胞培养瓶,结果她给我送成了用于悬浮细胞培养的培养瓶,细胞也是不贴壁,所以,建议你核实一下是不是这个原因
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问
培养箱出问题,细胞还能用吗?
达达力呀
你是做什么检测的?我们之前遇到过断电的情况,我们是做细胞核型分析的,结果还好。
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问
血液保存
twoicedragon
将全血离心后取血清-80度保存,全血冻存的话,红细胞会裂解,血清会被红细胞液污染。
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问
WB 条带上出现类似气泡的东西该如何改善?
tao0129
配胶用玻璃板和边条应及时洗净。玻板未洗净的坏处很多:1. 尽管玻璃看似平滑,但是一些细微的凹陷处会凝结肉眼无法分辨的胶颗粒(摸上去疙疙瘩瘩),其坏处是,在该部位极易导致不均匀的胶块,样品经过该处或电泳散热不好,条带变形。2. 如果是RNA的超薄胶,胶板的颗粒会导致局部巨大气泡,非常难于清除;蛋白胶也会导致一些小气泡的产生。3. 玻板没洗净的另一个坏处是,由中学物理知识可知,玻璃表面越光滑粘附越牢,
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问
我的WB条带出现在它不应该出现的地方怎么办?
赵栋2012
qingshi战友回答:我想你可以从几下方面考虑:1. 从组织中提取的蛋白春不纯,用什么方法抽提,抽提完了后,PAGE的结果怎么样?2. 如果PAGE结果明显,而WESTERN无信号,你应该考虑两点:60KD左右的物质可能是什么,抽提过程中自带的,还是il-6形成DIMER?第二复核你用的抗体3. 一定要跑变性不连续电泳,CHECK你用的LOADING BUFFER。4. 换用标准品的IL-6,作
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问
跑WB的内参,只有一个孔没有条带,但是其余的孔都有条带,而且上样量是50ug,怎么回事?
你过de好吗
我的也是,不过我是最后一个孔内参条带没有,跑两次都这样
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问
蛋白没有表达是啥原因?
大爱蒙奇奇
蛋白不表达可能有很多方面的原因:1:质粒是否成功转化到你的宿主菌。2:改变诱导时机和诱导剂浓度,一般当OD值在0.5-0.6时较好。3:也许蛋白已经表达,只是不是已可溶形式表达的。4:也许是蛋白表达过低,SDS-PAGE不能发现。5:你用的菌错了,要用BL21(DE3).PET22b也的用这个菌。具体的你还得分析,我也不是很了解。
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问
求问大肠组织标本保存条件及方法?
emily_cby
是否需要加rna保护液
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问
显微镜目镜和物镜多少倍可以看见血小板?
论文菌
看不到的,confocal 60倍油镜 隐约能看到血小板
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问
WB高背景问题求助
极客医生
如果显色液 确定没问题 考虑下 胶本身的问题 和 封闭液不太好
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问
RNA抽提后出现奇怪情况
114558606zlm
可能是提取的RNA含有杂质或不纯!
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问
15kd 湿转半小时会不会转过头?
糖guo
如果害怕转过了,可以尝试放两张膜来转,前后两张都显影,看看结果。
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问
谷胱甘肽标签蛋白包涵体纯化方法?
一乐到底
我也是使用GST标签蛋白,用全式金蛋白纯化方法,试剂盒要求过柱纯化前先变性再复性,在尿素透析复性过程中一直出现沉淀,请问怎么解决
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问
RNA 如何在提取过成中如何避免降解?
论文菌
用过柱法提取RNA比较好
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问
血液样本冻存应该用什么试剂?要先去掉红细胞么?
芳草流年
应该能提出来,我们实验室经常做microRNA提取,试剂盒用过QIAGEN、ROCHE、BIOG,效果都还可以。
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问
微球菌核酸酶实验 DNA 电泳一直观察不到 200bp 是为什么?
dxy_gm4sarl3
我是先低渗缓冲液处理细胞,然后取沉淀,直接加入微球菌核酸酶缓冲液和微球菌,
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问
传代培养喉癌细胞有哪些注意事项?染菌好多次了,求助
alaling
1.首先做一个培养基的培养,看看无任何条件下是否有菌生长,以此确定是你的环境(包括超净台、培养器皿、培养基等等等等)是否有问题2.如果培养基有菌生长,从培养环境开始找问题,比如培养基是不是被污染,用的器皿是不是被污染,超净台是不是已经不达标(这个是最惨的……)等等3.如果培养基没有菌生长,可以从自己的操作上找找原因,是不是操作规范。
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问
最后溶解样品用 DEPC 水量多少合适?
dxy_za0jbge8
动物组织或者血清最后加15+20μl
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问
同一特异不同退火温度的 PCR ,如何确定最佳温度?
王二狗爱科研
温度越高则条带越暗,再高就没条带,我做过
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问
什么情况下转化平板上会出现卫星菌落?
李存耀
氨苄的抗菌效果的时间段在13-16个小时,一般转化后14个小时菌斑就能够满足接下来下面的实验要求了,菌斑直径在0.5mm左右,16小时后还在37℃下培养就会出现卫星菌
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