最近细胞总是复苏失败，是什么原因？

建议可以使用程序降温盒，操作简单，冻存效果极佳，CellHome这个品牌不错，良心推荐，用的好的回头点赞哦

建议复苏后采用20%FBS培养几代，待细胞形态正常以后，再降低FBS浓度；另外，建议不要用超低温冰箱长期冻存细胞，以为超低温冰箱温度可能不够低，另外，难免会频繁打开，这样会使细胞严重受损的。建议使用液氮保存，液氮不贵的几块钱一升，可以用很久，而且还不怕停电，以前我也喜欢用超低温冰箱，自从上次停电导致所有细胞全军覆没以后，再也不敢了... ...

大家好，我的细胞是复苏后第一代3,4才能长出正常形态，不敢中途换液，一换就冲的飘起来。3,4天之后传代，贴壁极差，不用胰酶，直接就能轻易吹下来，然后就是一团团的的，离心后重悬30-40下，接种后，细胞皱缩还是一团团的。之后就不贴壁了，还消耗培养液，呈皱缩的小圆形。放置多日后，还是不贴壁。。。额，我的细胞这是怎么了？？？细胞是APP/PS1 双转HEK293

我的细胞最近也是复苏出现问题：复苏后第一天细胞贴壁，但是细胞伸展较差，虽然是贴壁，但是细胞大部分还是圆形的。当天不换液。第二天再观察发现，细胞已经飘起来了。用的是DMSO10%+FBS90%，细胞是U87细胞。

试试1：3：6吧，DMSO+DMEM+FBS

个人认为： 1. 你所使用的东存液配方是可以使用的，我自己一直使用这个配方，没有问题。 2. 冻存时消化细胞是否过度造成过多细胞损伤 3. 逐级降温后的保存方式如何？-80还是液氮？如果是-80，冰箱是否断电过？是否放在冰箱深处或者靠近门口（频繁开启造成频繁冻融会损伤细胞）？放置了多长时间？ 4. 复苏时是否快速复温？ 5. 复苏后一般有两种处理方法，一种是加入10倍于冻存液体积的培养基，低速离心后传入培养皿，放置24h以上，带细胞完全贴壁后换液；另一种方法是不离心，直接用10倍于冻存液体积的培养基稀释细胞后接种培养皿，4-8h后观察细胞贴壁后换液。不知道你是怎么操作的？

考虑3个问题：1、冻存问题：胎牛比例太低，终浓度最好20%，我的冻存液一般是DMSO20%+70%FBS+10%培养液，全培吹打细胞后，加入等量冻存液，梯度冻存。复苏后有问题，是不是那一批细胞冻存时状态就不好？或者冻存前有污染？ 2、冻存保存：液氮罐没问题吧？是不是慢冻？ 3、复苏：37℃水浴快速摇晃冻存管，速融。长时间冻存的细胞，我们复苏后1天，再次传代，这样降低细胞残存的DMSO，然后细胞状态恢复的很快。做过对比，1天后再传代的细胞状态优于不传代细胞。你可以试试。还有，你提到最近复苏有问题，考虑排查下培养液、胎牛是不是跟原来一样，有没有问题~祝你好运！

细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，只要按着这个标准去做，一般细胞都不会受太大的损伤。你说细胞细胞在冻存后复苏一开始成活率还好，最近复苏不成功，考虑是冻存后保存的原因，是-80度还是液氮保？-80度保存是否由于经常开启导致温度经常波动？温度的经常性波动致使冻存细胞受到损伤，所以复苏不成功。

我们也用的是DMSO10%+90%FBS，还有就是复苏的时候一定要快速，不能缓慢解冻

其实按理来说癌细胞应该会很好养的，我觉得你这应该是冻存液的问题，因为我们配冻存液是（DMSO10%+90%FBS）因为有足够的血清细胞才能在冻存的状态下存活。还有你冻存了多久？复苏了多少管？