实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问没有用盐酸分化有什么影响啊？

diudiu2006

盐酸分化只是将残留在胞质中苏木精洗掉，使胞质胞核的界限更加明显。与DAB上色没有关系。怀疑你的DAB显色没有成功。

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问蛋白纯化时为什么检测不到杂蛋白？

kedaxiaoyu

穿透里检测也没有蛋白条带吗？敢问你是用什么洗脱液洗脱的，一般都是用咪唑，0.5M的咪唑柱子上的所有的蛋白基本上都就洗下来了（如果咪唑实在洗不下来的话可以用EDTA洗）……至于你所说的纯化得到目的蛋白，这个咪唑的洗脱浓度还得靠你自己去摸索。你说的是蛋白洗不下来，建议你如果是用低于0.5M的咪唑洗的话，可以考虑0-0.5M的咪唑走个短点的线性梯度，可以大概看下目的蛋白洗脱的大致咪唑浓度。

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问血浆可以做 Elisa 实验吗？

闫棟涵777

紫盖采血器采血后离心结果影响大么

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问做 IP 的抗体为什么会在 WB 中显现出 IgG 条带？

wyf-525

加入的A蛋白抗体和IgG 抗体，在最后一步的煮样中，被β巯基乙醇破坏了结构，变成了重链和轻链，随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同，又被你的B蛋白抗体识别出来，所以显影就出现了条带。

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问western blot中,如何运用凝胶成像系统照相？加完二抗用TBST洗之后该做什么准备？不想用胶片显影了

dxy_9qshwa77

请问那个bio-rad成像系统怎么拍这个照片呢？

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问稳定株real-time PCR检测表达升高1000倍 WB检测蛋白没有明显变化是为什么？

hl16010921

3 回答3337 围观

问大鼠肠粘膜组织的蛋白（例：occludin）如何提取?现在用的凯基全蛋白提取液G250，用哪种loading buffer?

Sherlock4ZFB

你好，我想问一下你做的肠粘膜组织是怎么提的？直接划下来吗？还是有其它的方法，能否告知一下？

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问ChIP 中收细胞一定要用刮刀吗，可以用胰酶消化收集细胞吗？

越努力越幸运AKSR

分析纯就是37.5％

3 回答3319 围观

问请问负二十度冰箱过夜存放的蛋白可以做co-ip吗？

dxy_m8i2olu4

这不会破坏蛋白间的相互作用吗

3 回答3178 围观

问实时定量PCR探针法和染色法的区别

常安iron

探针是特异性的，染色法是非特异性的

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问细胞培养上清中的蛋白浓缩后再煮沸，成了豆腐渣一样的东西是为什么？

远航TAJI

说明过表达组培养基中有很多蛋白，分泌性蛋白就是大量存在于培养基，与对照组比较有区别，很正常的啊！我想问，你用什么耗材浓缩的培养基？？？？

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问为什么我转完膜后，膜上没有任何条带，连 marker 条带都没有？

tobepan

连marker都没有？1.考虑转膜液的问题，是否过期失效？是否加甲醇？是否在低温条件下进行转膜？2.考虑转膜装置的问题。黑面在下，依次是海绵垫，滤纸，凝胶，PVDF 膜（膜一定要和胶贴好，不要有气泡），滤纸，海绵垫。3.转膜条件设置是否合理。我们实验室条件是 200mA，90min。供你参考。

9 回答6607 围观

问肺腺癌 p53 免疫组化用什么抗体好？

1862 围观

问干扰多久再流式上机啊

鹏21PE

1、通过荧光定量或WB检测确定siRNA是否干扰成功及其时间点，干扰效果一般根据siRNA转染剂量而有所差别； 2、根据确定的时间点，添加凋亡诱导剂，进行流式检测。

1 回答1212 围观

问为什么膜需要减成多段？

鹏21PE

不同蛋白大小不同，膜剪成多段可以同时孵育多种抗体。

1 回答686 围观

问使用磁珠拉蛋白，会不会使蛋白彻底降解掉？

wyf-525

有就是有，没有就是没有，我们实验室很多人都用不加抑制剂的裂解液洗，只要你的速度赶上蛋白变性的速度就行。

1 回答1297 围观

问关于封闭，转膜后封闭，不会影响目标蛋白与一抗结合吗？

鹏21PE

1、封闭液蛋白一般是牛乳清蛋白或牛血清蛋白，目标蛋白和一抗种属均不是牛或不抗牛蛋白时，封闭液蛋白不与目标蛋白或一抗发生结合反应； 2、封闭液蛋白只结合于膜上没有任何蛋白的区域，避免一抗与膜结合。

1 回答1596 围观

问能够扩出目的条带但是特别弱是为什么？

dxy_hzlavip2

我也是扩不出来，请问最后怎么解决的？

2 回答610 围观

问请问做泛乙酰化 WB 有哪些需要注意的地方？

dxy_74nqjka4

你好泛乙酰化是体外检测某个酶是否具有乙酰化活性的方法吗?

1 回答1722 围观

问Si-RNA 脂质体 lipofectamine-iMAX 转染，敲除基之后能维持多长时间？

xy05

ｓｉＲＮＡ是瞬时的，一般７２小时

2 回答10112 围观

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