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        曝光问题求助,背景很黑条带几乎看不到,是怎么回事呢

        相关实验:Western印迹技术检测蛋白质实验

        user-title

        只想顺利读博

        我的一抗稀释比例为1:1000,二抗稀释比例为1:1000,封闭时间2小时,洗膜10分钟一次,洗4次。

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        5 个回答

        user-title

        喵喵喵柏

        有帮助

        请贴一个图片

        背景黑可以用软件调整,需要区分是多克隆抗体,还是封闭不好,还是没有调整好呢?

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        1.二抗浓度可能高了,并且洗膜时间不够,最后洗6次,每次5min

        2、膜被曝光了

        user-title

        府宅

        有帮助

        原因:

        封闭没有做好,抗体有比较严重的非特异性吸附。解决:用5%的无糖低脂的奶粉做封闭,效果比BSA的还好还便宜。时间要摸索下。

        环境光源污染。解决:一个好的暗室。

        试剂问题。配置新鲜的试剂。

        user-title

        vae1476

        有帮助

        你的内参也是这样吗?如果不是考虑抗体问题,如果也是,封闭牛奶和BSA都试试

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你二抗用1:4000试试,可能是是二抗太浓了。但也可能是你一抗不特异。

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