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问
免疫荧光一抗没在摇床上过夜,就只在四度静置过夜会染不上吗?
dxy_gwrp7ndq
不保证能均匀敷上,效果会不好。
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问
qRT-PCR结果中复孔的cq值相差多少不可用?
cxsm
对于含量较高的基因来说,个人认为能接受0.5以内的差值吧,一般32个循环以后的基因,基本可以不用考虑了,除非处理之后有极大的变化,CQ值变小到30以内就0.5以内还可信,CQ变大了,最多1吧,放弃吧别考虑了
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问
用trizol提取总RNA时,在加入氯仿前的步骤都可以放在置于冰上的板子室温静置么?组织加入裂解液后室温放置与插入冰块中有区别么
府宅
上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,其余步骤在冰上操作
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问
流式检测未经处理的肿瘤细胞的钙网格蛋白的水平,为什么本地就很高
府宅
推荐染色时添加FcR block,加去死细胞染料另外阴性对照用同型抗体
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问
求问,我做的ROC曲线联合指标的面积比不上单个指标的面积,啥情况呢?我做的对不对啊,求大佬帮帮我说两句原因,我是个小白
bamboopiggy
如果单纯看你的说法,就是你的联合治疗,不如单药治疗,你首先看你下,你两个单药治疗的ROC曲线下面积是不是都大于0.5,如果都大于0.5,那没有办法了,如果其中一个小于0.5,你可以把这个结果翻转一下,再联合分析。
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问
双酶切产物OD值过高可能是什么原因?
bamboopiggy
胶回收的260,280没法看的,只是能给你提供参考浓度,算你的插入片段和backbone的比例。
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问
20220412分光光度计培训 提问
bamboopiggy
是的,是仪器自动把光程归一化为1cm了。光程归一化为1cm后,则吸光值A为1时,相当于dsDNA浓度约为50ng/μL、或ssDNA浓度约为33ng/μL、或RNA浓度约为40ng/μL。由此,可根据吸光度估算核酸的浓度,这种计算在许多仪器中可自动进行。
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问
wb条带特别细是什么原因?tlr4 肠蛋白1:1000
dxy_gwrp7ndq
你的问题是没有选对合适浓度的胶,一般使用的胶浓度为6%,8%,10%,12%和15%的胶,而不同浓度的胶对蛋白和指示剂的压缩效果不同,浓度越高,压缩的效果越好,指示剂和显影得到的目的蛋白的条带就越细;而胶的浓度越低,指示剂和蛋白就能跑的越分散,看起来就相对粗一点。
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问
双酶切怎么也没切完全,有假阳性怎么办?
bamboopiggy
你先看看你的酶切的接口会不会自连,然后可以做单酶切的对照,是否都可以同时切成线性。
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问
荧光定量PCR不制备重组质粒可以做吗?质粒可以
bamboopiggy
可以做啊,只要你有cdna片段就可以,或者是dna片段,也可以。
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问
求助6.12.24孔板细胞铺板密度,有大佬能给4倍镜下的照片参考一下吗?
dxy_gwrp7ndq
一般最适浓度为5~10×105细胞/ml。如一般10cm皿的细胞约300-500万个,一些细胞个体小也能达到1000-2000万,可根据所需细胞数目取出部分作稀释或连续稀释后计数。
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问
CsCl密度梯度离心一定会自从密度梯度吗,配置两个浓度的CsCl用在同一个离心管里会不会互溶?
bamboopiggy
不会的,你加上层的CsCl的时候,帖壁加,应该就没有问题。
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问
蛋白总是发成这样,为啥呢?
bqejjh123
可能是因为你的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的杂质含量太高了
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问
THP-1悬浮细胞贴壁严重可能是什么原因引起的?
喵喵喵柏
如果没有加入PMA诱导的话,一般是不会贴的确认一下自己培养的细胞是thp-1吗?密度比较大的时候会抱团,但是不会贴壁而且培养的时候,瓶子要立着,不要平放
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问
wb条带整个泳道都是黑的
bqejjh123
可能:1.凝胶不均匀冷却,中间冷却不好; 电泳系统温度偏高,这样容易形成混乱一片。2.可能是由于装置不合适,特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡,或者两边聚合不完全,也容易混乱。3.样品溶解不好。4.样品中含有不溶性颗粒。5.加样量过多。
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问
曝光问题求助,背景很黑条带几乎看不到,是怎么回事呢
喵喵喵柏
请贴一个图片背景黑可以用软件调整,需要区分是多克隆抗体,还是封闭不好,还是没有调整好呢?
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问
动物病料病毒分离分离中,如何只保证不含其他野毒感染,只分离目的病毒
bamboopiggy
病毒分离 取动物病理组织样品,分别制成100 g/L的 组织悬液,加青霉素(100 Iu/mL)、链霉素(100 pg/mL),4℃ 3000 r/min离心20 min,取上清液接种于Dulac细胞;接种后 6 h用300 mm01/L n葡糖胺(口glucosamine)37℃处理30 min。再培养72—96 h,将增殖病毒的细胞反复冻融3次,收集 细胞病毒液。用细胞病毒液再接种细胞,共传代
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问
请问做荧光多标的时候实验组合不变始终有一个抗体做不出结果,特异性不强,总不在它该在的位置出现,但是这个抗体做免疫组化却能做出来?
啵啵猪
免疫荧光影响因素多,位置不对可能是自发荧光,但免疫组化能出,可能是免疫荧光一抗浓度不合适
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问
从细胞中提取出的线粒体如何计数?
天一湖医者
不同种类的试剂盒提取的都不同。一般产品包装盒中都附有说明书的。小量质粒提取试剂盒 100-500ng/uL;一般能有300ng/uL
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问
细胞复苏之后不贴壁
biu2266
复苏血清浓度要提高,细胞密度最好增加
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