实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问药物作用于癌细胞，Bax蛋白表达降低，是否能说明不是通过凋亡而导致细胞死亡？

bamboopiggy

你不能只检测Bax啊，把bcl2还有caspase3检测一下再说，还要加个rescue的实验

2 回答632 围观

问核酸斑点杂交，倒掉预杂交液后，加入杂交液是只要加进去就行还是要点在点样那一面上

bamboopiggy

最好还是要点在点样那一面，那样接触比较多。

2 回答293 围观

问流式细胞仪测定细胞活性氧实验

天一湖医者

活性氧检测试剂盒（Reactive oxygen species assay kit）是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平

3 回答3743 围观

问实验中，料液中固含量高，操作过程中，膜面易产生浓差极化现象，显著降低膜通量，有什么办法可以改善这种情况？

未来9

在膜分别技术应用过程中，产生膜的污染是在所难免的，产生膜的污染的缘由许多，膜污染缘由比较复杂，但究其主要缘由是浓差极化和膜污染。浓差极化是膜表面局部浓度增加引起边界层流体阻力增加，导致传质推动力下降的现象，而膜污染是指料液中的微粒、胶体粒子或溶质分子由于与膜之间存在物理化学作用而在膜表面及膜孔中沉积，使膜孔堵塞或变小，膜阻增大，膜的渗诱率下降的现象。

3 回答437 围观

问有老师跑过BCL-2的蛋白吗，我做的缺血再灌注模型，跑了几次，换了两个抗体，但是跑出来的结果是反的，缺氧组比对照组多，不知道是啥

dxy_ewo205k

可以先做定量，看下mRNA水平的表达

3 回答476 围观

问PCR的阶段的作用为什么分这么多阶段 cDNA浓度的范围DNA/RNA比值。

Topmicro

变性、退火、延伸需要不同的温度条件和反应时间所以分阶段进行。

3 回答772 围观

问荧光定量PCR冰上操作

未来9

是的，RNA很容易降解，尤其在水溶液中，提取时尽量在低温进行如果操作时间长，降解太多，肯定会影响实验结果

3 回答428 围观

问SLC5a2 基因突变，导致肾性尿糖和尿氨基酸，引起口干多尿，如何逆转基因/修复基因，使其恢复至之前状态。

未来9

目前基因治疗主要有三种形式：一是将正确的基因导入细胞来替代错误的突变基因；二是直接修复错误的基因，也就是常说的基因编辑；三是在体外通过基因技术修改细胞，然后把修改的细胞导入人体发挥作用。但是糖尿病的基因疗法目前仍处于动物试验阶段，尚未用于临床。

2 回答663 围观

问重叠pcr没有条带，试过不同模板浓度，不同tm值，不同保真酶，怎样才能重叠成功？

微暖

引物设计:第一条片段的反向引物包含第二条片段的25bp左右，第二条片段的正向引物包含第一条片段的25bp，引物长度大概50多bp。分别扩增两条片段。以这两条片段为模板，第一条片段的正向引物和第二条片段的反向引物，pcr扩增就好了。

3 回答727 围观

问从细菌中提取酶，用常规的方法总是拿不到我要的蛋白。是不是也可以加点甘油或者PEG来提取?

天一湖医者

常规方法不行的话，加甘油也不一定有作用，可以试试不同ph

3 回答392 围观

问从细菌中提取酶，用常规的方法(超声波破壁)，总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁水性较强，需要加助溶剂才能提取？

天一湖医者

也可以加点甘油或者PEG来提取，但不一定会有作用。

3 回答307 围观

问蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，现在用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，请问修饰后怎么分开修饰的和未修饰的呢？

天一湖医者

可以用凝胶色谱纯化的方法试试。

2 回答464 围观

问Sephadex G-25(medium)柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗?若有，一般对盐浓度限度如何?

Hey裴pei

是有影响的。盐浓度较高的样品在柱子上走的峰要更宽，同时需要的柱子的分辨率也高，建议少上点样品，可以减少因浓度导致的影响。

3 回答572 围观

问标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？

天一湖医者

填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。

3 回答536 围观

问蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来，怎么办？

天一湖医者

加甘油/蔗糖：增加溶液粘度，降低蛋白之间碰撞几率，从而降低聚合概率降低孵育时间：减少蛋白和填料的结合时间。

2 回答965 围观

问如何测量DNA纳米花的浓度

bamboopiggy

通过变性凝胶电泳纯化，用紫外线吸收光谱来定量测定

4 回答547 围观

问核酸斑点杂交法，室温孵育需要在摇床里吗，还是放在室温环境就行

Topmicro

重要的是均匀，有摇床最好在摇床里。

3 回答477 围观

问细胞水平要做 Western Blot，一般需要多少量细胞提取的蛋白就够了？

实验菜狗lmd

主要和你的细胞大小，蛋白表达情况有关，细胞比较大，或者蛋白属于微量蛋白，那最好三个孔（6孔板）

4 回答2076 围观

问为什么提出的质粒的多是二聚体和多聚体形式？

一个小哭包

这个与宿主细菌的种类有关系，网上可以查到。与电泳也有关系

3 回答3026 围观

问为什么进行注射的时候要在小龙虾的第二腹节处注射啊

Topmicro

有利于药物的注射和吸收，其他部位也不容易打进去。

2 回答480 围观

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