实验问答

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问96孔板做病毒滴度怎么处理数据计算结果啊？小白求大神解答

bamboopiggy

MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒体积（mL）/细胞个数在96孔板中铺1×10^4个细胞/孔，培养基定容至100μL/孔；依据所计算出的病毒体积，逐个孔添加慢病毒，并于感染次日更换新鲜培养基。a．带荧光标签的慢病毒：观察荧光感染后72小时后，于荧光显微镜下观察细胞状态和荧光情况，确定细胞状态较好且荧光数较多的孔，对应为较适宜的MOI值。b．不带荧光标签的慢病毒：抗性筛选（puromycin/

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问请问 wb实验条带空白怎么办是什么原因呢求大神

未来9

wb无条带的原因很多，要逐一排除哦，比如：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等，都会导致空白条带。

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问请问我的抗体针对的是膜蛋白，封闭加吐温会不会增加细胞膜的通透性，从而使我的抗体进入膜内呢？

bamboopiggy

你可以不用带tween的液体配你的封闭液啊，没事的，封闭，只要有奶粉或BSA，溶解在缓冲液中就可以

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问expiCHO细胞第4天开始活细胞比例开始明显下降怎么办？

bamboopiggy

注意你传代细胞的比例，不能太稀了，但是也不能太浓，一般80-90%的融合率就要传代了。

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问电泳结果中出现纵向条纹的可能原因是什么？

bamboopiggy

样品中盐的浓度高了，可能需要换lysis

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问加不同抑制剂测细胞活力

bamboopiggy

这个不知道你是什么药，所以没法提供浓度，但是你可以查文献，看别人平时用什么浓度，你加10倍，开始做梯度。至少稀释到别人浓度的十分之一。

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问Huh7细胞克隆长不出来是什么原因

bamboopiggy

肝癌细胞系的细胞一般较小，克隆不好长，你可以多放点细胞，血清换好点的血清。

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问制备小鼠胸腺细胞悬液时，加入1 ％伊红-Y 染液后，为什么有时候细胞死亡过多？

Eason老歌迷

大多数情况都是你的样本质量有问题，如果是培养的细胞，一般都是培养时间过长，或者是因为你的实验手段导致细胞死亡。

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问计数不同种类的白细胞时，用Giemsa染液染色时，染色不均匀时或者染色有沉淀是因为什么？怎么解决？

天一湖医者

Giemsa 染色，可提供对比强烈的多色性的染色，但沉淀出的染料，使细胞看起来呈斑点状。由于氧化原因，在染液表面形成沉淀，当加入水时，在整个溶液中，特别是在载玻片的表面上形成浮渣，冲洗染液时通过向上提升液面，而不是倒出液体或取出栽载玻片，在最后步骤，为防止细胞和浮渣接触，彻底冲洗以便去掉留在制备物中的浮渣。

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问用lipo2000转染细胞是否需要换液，提取蛋白转染时间24h够吗？需不需要培养48-72h？

bamboopiggy

lipo2000毒性大，需要换液，提蛋白最好48h以后

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问细胞培养过程中，总是不容易贴壁，怎么弄呢

大草原的小灰驴

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问我的CHX(用DMSO溶的)实验是0 2 4 6h，请问对照的DMSO应该在什么时候加呢？

bamboopiggy

可以在一开始的时候就加上，然后和6h的一起收。因为DMSO单纯应该是不起作用的，时间就按最长的来。

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问请问悬浮细胞如果做transwell 测细胞的迁移能力？如果按照贴壁细胞的做法，悬浮细胞会附着在小室下层膜么，会不会直接掉落？

府宅

会掉落，也会附着。由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室

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问血管内皮细胞在培养的时候一般都用什么培养基呢？

dxy_gwrp7ndq

可以用cascade biologics的Medium 200培养基

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问观察变移上皮时，用高倍镜观察的时候，基底层、中层细胞及表层细胞分界不明显怎么办？

师医生说

移形上皮细胞一般属于鳞柱交界，表层细胞呈立方形或椭圆形，体积较大，中层细胞为多边形，基底层细胞多为矮柱状或立方形。另外，在染色后是需要观察，细胞边缘的着色和厚度的。中层细胞多着色不均匀，基底层细胞染色最深，而且是边缘较厚！表层细胞多层裙边样。

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问细胞太少涨不起来怎么办

美丽的天使GHX

多加点血清。2.有多加点同样细胞，3.加点那个细胞培养贵过的上清。

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问慢病毒文库感染293T细胞，怎么确定MOI=0.3?

bamboopiggy

MOI的计算方法：MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒体积（mL）/细胞个数，你可以调整病毒的加入体积和细胞的个数，使MOI=0.3

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问ana-1细胞污染,培养液浑浊变黄,求助挽救办法

雲深何跡

大概率挽救不了了，建议更换新的试剂和耗材

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问细胞荧光染色法显示结果这样了，跟之前的不一样了，怎么处理啊

天一湖医者

或者是因为你的细胞不纯,比如转染了你目的基因的表达质粒。

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问如果灌胃小鼠药物后灌胃针有残留怎么办？

戊QT4J

给药的时候尽量多吸点药品。按照你需要的刻度进行灌胃。浓度恒定，保证灌胃量就行。

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