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猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
PCR 扩增的体系条件应该怎么摸?一般要先从哪项开始?为什么进行复合扩增体系条件就要重新摸?
bamboopiggy
如果你不想摸条件的话,可以在你正式pcr cycle前加一个touch down的程序,这样基本都可以跑出条带来。
2 回答
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问
lo2可以用高糖dmem培养吗?用1640长得太慢了感觉?
Xiong205
按照官方推荐培养基比较好,我做lo2不算慢,如果已经是太慢的程度,考虑是否是支原体污染,支原体污染的重要特征之一就是细胞生长速度明显变慢。可以检测一下培养液是否有支原体,如果有用biomy3清除14天左右。细胞状态会变好。
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问
有人用trizol同时提取rna和蛋白过吗?按网上的步骤提取的蛋白质是不是很很难溶解?
天一湖医者
具体的提取步骤如下:1.样品加氯仿分层后,移去上层水相(该水相里就是RNA,可照常继续进行RNA的提取),加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA,涡旋混合,室温放置3分钟,2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注:这一步同时可以除去未完全消化的残渣】2.小心吸出沉淀后的上清,加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟,2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。3.加2ml含0.3M盐酸
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问
大家用超敏化学发光成像仪显影western blot时是怎么加显影液的?
whilt-shirt
显影液现用现配,均匀加在条带上,然后晃匀
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
bamboopiggy
EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞中,不同时间点酪氨酸磷酸化位点的变化
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问
乳腺癌细胞中有一些小黑点,是黑胶虫吗?应该怎么办?
Summeryi
正常情况下,细胞也会产生一些小碎片呈现为黑色。还是要观察黑色的点点是否在运动,并且注意细胞的状态
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问
如何给文献作者发邮件借文献中用的细胞系?
Eason老歌迷
如果是国外的,还得是自己学着做。如果是国内的可以试着找联系方式,发邮件问一下。
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问
蛋白诱导时试了37 28 16℃ 都表达在沉淀形成包涵体了 16℃都没有还有再试温度(比如25 32℃)的必要吗?
未来9
诱导温度一般控制在15-25℃时能够减少蛋白包涵体形成,因此25℃以上应该可以形成包涵体。可以再改善温度以外的因素:比如诱导剂浓度等。
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问
细胞没有污染,但经常有漂浮的细胞的原因
番茄炒蛋不加番哈哈
会不会是细胞的状态不好呢?如果是需要基质胶的,也可能基质胶不行吧,我不专门养细胞,有限的认知只能到这一步啦!
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问
细胞培养出现蜂窝状是什么原因
Eason老歌迷
是不是细胞老化呢?如果出现细胞老化,就会有增殖减弱,贴壁能力减弱 你可以用细胞衰老检测试剂盒染色,来判断一下
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问
细胞污染时都会有哪些现象
bamboopiggy
长的速度变慢,细胞出枝叉,液体容易变黄,液体中有小点点,液体中有絮状物
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问
[求助]肠神经元原代培养
天一湖医者
可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc
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问
求助,同时跑的胶,为什么会这样,分子量分别为36(内参)、28(AQP2)、65(NK-KB)
Summeryi
第一张背景过强,可以通过增加封闭时间或者洗膜的次数来改善。后面两张的蛋白有不同程度的降解,实验的样品尽量避免反复冻融,并且低温保存~
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问
收集鳟鱼胚胎提取物时,经过胚胎融化、过滤、离心厚,收集到的上清液,怎样稀释到理想蛋白质浓度?
我也是锦鲤ye
测量蛋白质浓度,用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。
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问
请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力,具体步骤?按照正常贴壁的做过几次,上室种2万了细胞,染色没有细胞。
bamboopiggy
悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室,移除上室,用倒置显微镜观察可直接计数,在高倍镜下随机选取5个视野进行计数,最后计算平均值。或者收集下室培养液,用流式细胞仪计数
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问
使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?
dxy_nkqusvl2
EDTA是一种可以螯合Mg2+、Ca2+的螯合剂,细胞表面很多结合蛋白都带有这个Ca2+,因为Ca2+的作用细胞之间还有细胞与培养瓶之间才能连接,所以加入EDTA能有效率的将细胞从培养瓶上消化下来。
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问
细胞培养密度太低少会死吗?求助
Keven轩
会的,因为细胞在增殖分裂的过程中会旁分泌一些促生长因子,如果细胞密度过低,无法产生这些因子导致细胞增殖更新变慢,导致衰老凋亡
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问
请问下培养液第一次和第二次配的颜色不一样 还能用嘛?右边是第一次配的左边是第二次配的
异乡人hyq
应该可以用的,估计与高温灭菌产生少量碳化有关。
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问
提取的蛋白有少量沉淀那可以有什么办法补救一下吗?
Eason老歌迷
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。如果已经出现沉淀,可以改进一下实验方法:1、离心力降低为原来的20-50%,2、改用截留分子量更大的超滤膜,3、在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次再继续浓缩,4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯,减少沉淀的发生。据我所知,没啥补救
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