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问
T3代细胞传代,生长9天细胞突然变黄,显微镜下镜检全都是死细胞,为什么细胞突然死亡?
bamboopiggy
考虑细胞数目是否太多?养的时间太长,导致细胞太拥挤,然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。
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问
P62跑出来条带淡背景很脏怎么办,我用的是abcam的一抗,1:10000。大佬救救孩子吧
Eason老歌迷
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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问
为什么用超滤膜包过滤出来的样品浑浊
天一湖医者
过滤后滤液仍然浑浊的原因1.滤纸破裂(1)玻璃棒下端紧靠在一层滤纸处,滤纸被戳破。(2)盛混合物的烧杯没有紧靠玻璃棒,滤纸被混合物冲破。2.混合物没有经过滤纸(1)液面高于滤纸边缘,混合物直接从滤纸和漏斗的间隙直接流下。(2)仪器不干净:漏斗下端不干净;下面收集滤液的烧杯不干净。
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问
如何高效的学习异种移植实验技术
bamboopiggy
从jove上找视频看,然后自己用废鼠动手做,多练几次。如果能找到会做的人,指点一下效率会更高
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问
关于组织消化后有组织块的问题
天一湖医者
因为胰酶消化时间太长细胞破碎掉了。可以试试不用胰酶,只用胶原酶,减少组织用量。
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问
组织细胞消化液的注意事项
天一湖医者
消化酶在-20度下,放一个星期左右是没什么问题的,时间再长了不太好。
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问
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白有必要用Ni柱进行纯化吗?不纯化直接用来免疫可以吗?
天一湖医者
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白是有必要用Ni柱进行纯化的。建议纯化后再用于ELISA.否则可能会产生很多非特异性的信号和比较高的背景.
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问
为什么用考马斯亮蓝法,空白值比样品吸光度值高
天一湖医者
出现这个情况可能是你的样品中的蛋白质含量确实很低,低过一定浓度时,结果就没有参考价值了。也有可能是考蓝工作液存放时间太久失效了,可以用一些蛋白标准品(比如BSA)来检验一下考蓝工作液是否正常。如果要用缓冲液做空白组的话,就用和蛋白样品一样的缓冲液就可以了
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问
细胞降脂模型不好建立,诱导分化不了成熟脂肪细胞,脂滴较小是什么原因
Eason老歌迷
诱导剂一定要选好,不能用甲醇固定,因为甲醇为脂溶剂,可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水,甘油明胶封片。
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问
培养贴壁细胞,例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间,如何判断?
bamboopiggy
加入胰酶后,润湿一下细胞,然后吸出胰酶,不用吸的太干净。然后镜下观察,细胞变圆了,就可以终止胰酶消化了,容易消化的细胞大概30s-1min,不容易消化的,可以放37度数分钟,主要镜下观察形态改变
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问
培养的原代卵巢颗粒细胞支原体污染如何判断?
bamboopiggy
400X看不到支原体的,检测支原体最简单的方法就是取培养液,直接进行pcr检测。
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问
如何制作简易的小鼠代谢笼
天一湖医者
这个比较详细,参考一下http://www.xjishu.com/zhuanli/01/201821722968.html
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问
请问如何确定药物作用于细胞的靶蛋白是什么?脂溶性很差的药物能通过细胞膜吗?
天一湖医者
.高通量筛选的方法 用微量滴定之类的方法,看分子能否与已知的蛋白质结合。一般只做计算机算出来的特定蛋白质
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问
可否使用与原先不同的培养基?
以水为师ISD8
可以的,但是不能一下子更换条件。要循循渐进,比如将两种培养基混合,不断换液,不断加大新换培养基的比例,就能更换称新培养条件。
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问
为啥我36kd出来的不好,而15kd出来的就好很多呢
bamboopiggy
不同的抗体,杂出来的条带形状会不一样,可能你15kd的抗体好
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问
在跑琼脂糖电泳时条带有拖尾,无法判断是纯合子还是杂合子,怎么避免这种情况?
bamboopiggy
感觉你提高一下琼脂糖胶的浓度,尽量拉开两条带,实在不行就加阳参吧。和阳参同一水平的,就是纯合子,否则杂合子
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问
如何判断悬浮细胞状态?
bamboopiggy
悬浮细胞状态好的话,单个细胞呈球形,透亮,没有贴壁,没有变形
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问
RAW264.7细胞怎么避免过度分化?
浅陌NPKT
1.传代时密度稀一点20%-50%2.传代勤快一点,基本每天都传代,密度达到70%以上就要传了3.血清一定要好的,比如乌拉圭,Gibco的血清4.传代时,胰酶消化时间短一点,只要半贴壁的细胞,贴壁分化的细胞不要,操作轻柔一点,不要刺激到细胞
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问
请问小鼠AWR测定的球囊如何制作
bamboopiggy
自制结直肠扩张球囊 (简称球囊):一次性保鲜袋用塑封机制成长2 cm,直径0.8 cm,一端封闭的圆柱形球囊,输液导管插入球囊中,导管与开口端用丝线结扎,确保密封不漏气。测量时将球囊插入小鼠肛门,深度为球囊结扎线距肛门括约肌大约0.5 cm处,用胶带轻轻将外端导管固定在小鼠尾巴上,以防球囊在实验过程中滑出。导管通过三通管一端与血压计相连,一端连接注射器。小鼠在实验前12 h禁食不禁水。将小鼠放置在
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问
细胞传代过程中的问题?
Eason老歌迷
第一个问题:也有可能是支原体污染,或者是培养基pH值过碱化,或者是你没有掌握好传代的时机,细胞老化了;还有就是可能接种细胞起始浓度太低了。第二个问题:首先你打错字了,你想表达的可能是抱团生长是吧。抱团生长有很多原因啊。细胞离心速度过大或时间太长。你消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开。你的细胞老化了。或者是你传代的时候没有吹打均匀,细胞团过多等等
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