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问一下,机器显影同一张wb膜,加显影液使得显影液铺满膜后需一不需要把膜上多余液体吸干
bamboopiggy
对,要把多余液体吸掉,但是不能吸干,膜要是湿的
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问
临床组织标本冻存已久(半年以上),还能做PCR吗?
天一湖医者
基本上不可能成功了。mRNA都降解完了。要做RT-PCR应该尽量选择新鲜的组织材料,即使保存,也要-80°,而且时间不要太长,最多几天吧。
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问
猪肺原代肺巨噬细胞生长速度比较慢,贴壁效果不好怎么办
Eason老歌迷
细胞生长速度慢的解决办法:增加起始培养细胞浓度;换入新鲜配制培养液;补加生长因子;血清需要保存在5℃到20℃,培养液需在2-8℃避光保存;含血清培养液在2-8℃保存,并在2周内用完;要轻轻吹打消化细胞;分离培养物,检测支原体;比较新培养液与原培养液成分,让细胞逐渐适应新培养液。细胞不贴壁:细胞的传代最重要的是胰酶处理时间:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴
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问
质粒过表达,CMV启动子转录起始位点是什么?细胞内转录出的mRNA有5'UTR吗?
天一湖医者
启动子一般位于转录起始位点的上游。启动子位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。
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问
人心肌细胞系都有哪些?怎么选择 人的心肌细胞怎么分离
天一湖医者
一类是普通的心肌细胞,包括心房肌和心室肌,含有丰富的肌原纤维,执行收缩功能,故又称为工作细胞。另一类是一些特殊分化了的心肌细胞,组成心脏的特殊传导系统;其中主要包括P细胞和浦肯野细胞,它们除了具有兴奋性和传导性之外,还具有自动产生节律性、兴奋的能力,故称为自律细胞,
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问
Tunel凋亡和双染测凋亡有什么本质差别吗?
Eason老歌迷
双染法特异性高,简单易行。tunel灵敏度高,但是成本高。最好是配合着用
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问
有哪些多重免疫组化技术平台?哪个比较常用?
天一湖医者
上海阿克曼医学检验所(阿克曼病理)佰诺全景分析技术平台等
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问
使用caspase 3/7检测细胞凋亡,为什么正常培养的细胞,荧光值也非常常高?
bamboopiggy
因为细胞状态可能会有自发荧光,你设好对照组,圈门就可以
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问
慢病毒文库感染后,多长时间第一次收取细胞,作为基线?
bamboopiggy
一般感染起作用要48-72h,你可以48h收第一次
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问
iPS细胞在复苏培养的过程中容易遇到的问题有哪些?
天一湖医者
培养细胞不贴壁? 悬浮细胞成簇?原代细胞培养物污染?培养细胞死亡等问题。
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问
CO—IP实验组背景脏,看不清条带,有什么优化办法么?
bamboopiggy
你的total input呢?是不是wb的抗体不好使,检测不到
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问
最近好几次Western blot出来的结果不满意,怎么办呢?
丁冉1234
有可能是曝光液时间久了失效或是条带上沾了太多的曝光液
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问
怎么判断细胞是否染菌
未来9
只能根据经验去判断,细胞内出现小泡越来越多,细胞间有黑点布朗运动,细胞崩解,生长受限。
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问
固相免疫分析时,捕获蛋白的免疫分析的亲和力可以通过哪种方式增加,怎么增加实验中蛋白的结合率?
bamboopiggy
找到合适的ph值,找到合适的蛋白浓度,做好预实验,
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问
PANC-1细胞为什么看上去长不满
半糖奇朵
可以调整下培养基血清的配比,或者查一下权威文献中该细胞系的培养方法
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问
求助,如何判断细胞的对数生长期
天一湖医者
判断细胞是否处于对数生长期的方法:1. 细胞汇合度达到70%-80%时基本上是出于对数期,在显微镜下一观察就可以 。 2. 做生长曲线一作图。3. 细胞计数,养上几个孔的细胞,每隔1-2天消化一个孔的细胞下来用台盼蓝染色血球计数板计数。4. 如果是简单的判断一下,要搞清楚细胞生长的不同时期,刚开始细胞生长一般是悬浮的,后来贴壁生长,直到生长到长满瓶底80%时间都是对数期。细胞的对数生长期:对数
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问
细胞提取rna跑胶条带太暗,还有弥散条带怎么办
Eason老歌迷
扩增杂带?解决办法:退火温度提高,延伸时间缩短,混合样品时放冰上,尽量别对着样品说话,以免污染样品。
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问
外周血淋巴细胞染色体实验中,分裂相极少的原因?
bamboopiggy
不是试剂的问题,就是淋巴细胞收集的问题,淋巴细胞的量要够
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问
关于细胞传代培养的细胞问题?
墨尔本
如果有仪器和试剂的话其实用AOPI进行染色会更直观,死的是红色,活的是绿色。
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问
请问碱性尿素缓冲液如何配制,PH值应该为多少?
bamboopiggy
先配缓冲液:8.95g磷酸氢二钠,3.4g磷酸二氢钾溶于水,并定容至1000ml,然后再加入30g尿素,因为尿素缓冲液pH值为6.83.可以加NaOH调至7.0
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