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        怎样提高原代乳小鼠心肌细胞的得率?得到更多跳动的心肌细胞?

        相关实验:肌组织细胞培养实验

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        Guoood

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        3 个回答

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        此用户已注销

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        用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞.倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度.结果心肌细胞形态良好,自发搏动,细胞成活率可达到98%,纯度可达到95%.结论本方法培养的心肌细胞存活率高,纯度高,是一种理想的心肌细胞原代培养方法

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        Eason老歌迷

        有帮助

        最近看了好几篇文章,关于改良乳小鼠心肌原代培养的。你可以试一试两步法,,0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化。当然还有很多种方法,你都可以试一哈

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        天一湖医者

        有帮助

        (1)取BATcell的Isolationbuffer按1:1000向其中加入p/s,4°C保存。Notice:用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138),用滤器过滤消化液,并置于37°Cwaterbath预热。(2)Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)1)将新生Mice泡入70%EtoH中约5mins进行消毒;(出生后两天内)2)剪开其肩部中间的外皮,两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT(位于肩胛骨间的蝴蝶状组织,尽量勿取到其他多余组织)移入含PBS的60-mmdishes中;3)用PBS洗2~3遍;4)将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolationbuffer中;37°Cwaterbath中消化30mins5)30min后将消化液用力甩,以使附着的cell散落;液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。6)用筛网将消化液过滤至15ml离心管中,离心:200g,5min,弃上清;7)用Isolationbuffer(不含collagenase)吹起离心管底沉淀,混匀,离心:200g,5min,弃上清;8)用5ml20%FBS-DMEMmedium重悬cell,接于60-mmdishes中,培养,次日先用培养液清洗下再换液;取过很多次了,只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~

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