实验问答

21,892,775 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问图示为70分子量的marker位置膜上有但没有显影，目标蛋白分子量是75也没有显影，这个目标以前做过显影出来过。请问是为什么

whilt-shirt

检查一下一抗二抗是否正确，建议重新配制新的一抗二抗

3 回答188 围观

问酵母双杂涂二缺板不长是什么原因呢？

bamboopiggy

大问题可能是两个蛋白不互作。小问题是：有可能转化过程有问题。质粒质量不好。培养基有问题，酵母感受态不好

2 回答2221 围观

问请问这几个蛋白质pull down结果该怎么看呢？

bamboopiggy

pull down的wb结果，其中input指的是whole lysate的上样，然后用s-protein 做pull down，图B说明ASAP和ATP5A可以相互作用。C说命ASAP和ATP5C可以相互作用。然后用asap做IP，可以拉下atp5a和atp5c来。都是为了说明他们能相互作用SFB指的是SFB标签=S-tag, Flag-tag, and SBP-tag 融合到一起MBP指的的

3 回答10145 围观

问求含有8M盐酸胍的样品如何跑SDS-Page

bamboopiggy

需要通过把样品从8M盐酸胍中复性，然后纯化，然后再跑SDS-Page

3 回答1660 围观

问体外转录，转录酶结合在DNA双链的哪条链上，怎么判断是以那一条连作为模版？

Eason老歌迷

RNA聚合酶上σ 亚基与启动子上特定区域的特异性结合，或者说启动子上特定的序列，就决定了哪一条是模板链。

3 回答1103 围观

问用质粒克隆某一DN片段，我我不明白，两端是如何终止的？

bamboopiggy

终止于您的primer binding的位置，没有引物结合，就无法扩增。

2 回答384 围观

问体外转录，模版DNA必须是双链吗，单链DNA可以作为模版吗？

bamboopiggy

单链DNA可以作为模板，但是起始必须是双链。DNA模板必须包含噬菌体聚合酶结合并开始RNA合成所需的双链启动子区域。转录模板包括经克隆构建的质粒、基于RNA前体进行第一链及第二链合成（例如aRNA扩增）得到的cDNA模板，以及通过PCR方法或对化学合成的寡核苷酸进行退火所得到的线性模板等。在设计转录模板时，必须确定需要的是正义链还是反义链转录本。若RNA是要用作与信使RNA杂交的探针（例如：Nor

3 回答2283 围观

问细胞膜上有很多蛋白质，如何鉴定膜转运蛋白？（亲和标记膜重建）

whilt-shirt

可以采用荧光标记或者His探针试试

3 回答534 围观

问在质粒的双酶切以及回收中，为什么DNA的甲基化程度会影响核酸限制性内切酶的活性？

未来9

DNA甲基化以后，就不再被限制性内切酶识别和切割。

3 回答998 围观

问在Assay中选择Absolute Quantification后，溶解曲线怎么设置呢？

bamboopiggy

绝对定量是适合需要测定靶点实际拷贝数的研究人员采用的实时荧光定量 PCR 分析方法。要进行绝对定量，需对已知浓度的目标模板溶液进行几次连续稀释，采用实时荧光定量 PCR 扩增，利用获得的数据生成标准曲线，标准曲线以各靶点浓度及相应的 Ct 值绘制。然后将未知样本的 Ct 值与此标准曲线进行比较，确定其拷贝数。而溶解曲线是看引物特不特异的，按照常用的方法设置就好。①快速升温至 95℃，将反

2 回答409 围观

问请问这个pull down结果图怎么看

bamboopiggy

没看到图，全靠猜了，应该是在293T中过表达了ASAP以及ATP5A、5C，然后用抗体互相拉，证明他们之间有相互结合。至于里面写total input的，是全细胞裂解液，293T细胞中，这几个基因过表达成功。至于用293T细胞，是因为293是一个各种蛋白表达量都比较高的工具细胞。

3 回答1207 围观

问请问胶的边缘为什么会弯，下次如何避免

未来9

会不会是有点漏胶玻璃板要洗干净，注意固定好玻璃板

3 回答444 围观

问人体异种移植性肿瘤移植过程中如果出现针头刺伤会不会转移到自己体内？

balalaLy

正常来讲人体的免疫系统会把带入人体的肿瘤细胞杀死，裸鼠成瘤的一个原理也是因为裸鼠的免疫缺陷特征。不过凡事都有例外，做实验保护自己和周边人最重要，出了问题尽快上报老板，该就医的就医。

3 回答445 围观

问image j的Fiji版本电脑使用不了是为什么？

天一湖医者

可能的原因是文件的路径包含中文名称

3 回答1425 围观

问做双酶切原本质粒大小3400多bp，两酶切位点之间的片段40多bp，为什么切下来跑胶只有2000多bp，不应是3000多bp么？

dxywode

提得好的质粒应该绝大部分是超螺旋的，跑得比marker的线性条带快。如果你5K的质粒真跑到5K的位置，才是没提好呢。想确定质粒的分子量最简单的办法是用单酶切成线性分子，再和marker比较。

5 回答314 围观

问用Heochst33342直接染色如何看细胞是否发生凋亡

bamboopiggy

图二发生凋亡，Heochst33342染色后，直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染

3 回答2728 围观

问在对细胞株进行敲低时，设置多组敲低序列是排除脱靶效应（off-target effect）么？如果没有做多组敲低，应该怎么弥补？

balalaLy

赶紧补呗，常规都是做三组，确保有两组以上能用。

3 回答628 围观

问细胞IF，共聚焦显微镜相同参数观察对照组实验组的细胞基本都染上颜色了只是对照组的亮度明显比实验组暗，请问亮度区别如何统计学分析

bamboopiggy

你用的共聚焦的电脑上应该有数据处理的软件，读出灰度值，就可以。

3 回答390 围观

问双标记探针QPCR问题

dxywode

出现非特异扩增或引物二聚体：反应体系内模板浓度太高以及模板核酸质量较差，可能导致出现抑制 PCR 反应的现象。在绝对定量时表现扩增效率大于110%。解决方案：去除模板浓度最高的反应孔并重新分析标准曲线；对目的基因做标准曲线，一般用质粒做梯度稀释，或用 PCR 产物做梯度稀释，然后做定量扩增，通过曲线评估反应效率。绝对定量有效的扩增效率在 90%-110%；重新纯化模板，去除模板中存在的潜在抑制物。

3 回答642 围观

问怎样解决PCR复合扩增中的扩增不平衡的问题？

dxywode

通过向原有PCR反应体系中加入PCR添加剂，来降低双螺旋DNA的稳定性，从而解决等位基因扩增不平衡的问题；所述原有PCR反应体系为所述对待测等位基因进行PCR扩增出现等位基因扩增不平衡情况时所采用的PCR反应体系。实验证明，该方法确实可以有效的解决由于“部分待测等位基因在PCR扩增过程中解链形成复杂二级结构或/和DNA双链解链不充分”而导致的等位基因扩增不平衡。

3 回答813 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序