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22,005,612 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
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问
求WB大佬指导向下图这样子的蛋白条带改如何更改孵育条件,才能跑出来好看到的条带?
汤姆卜丽波
这种情况有可能是一抗浓度太高,导致抗体非特异性结合。降低一抗浓度。洗膜的时间和次数不够,导致其他蛋白没有清洗干净。提高洗脱时间和频率。封闭物用量不足。提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜。封闭物使用不当。检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭。封闭时间不够。室温37度封闭1小时以上,4度封闭过夜。一抗稀释度不适宜。对抗体进行滴度测试,选择最适宜的抗体稀释度。一抗孵育的温度偏高。建议4℃
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问
WB中同一个电泳槽 两块板电泳速度不一致
whilt-shirt
电泳漏液会使电流过低,导致电泳速度下降
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问
PCR与EDTA,验证mRNA表达
汤姆卜丽波
用真空采血管取血,然后就是正常的试剂盒pcr操作,有专门的试剂盒,也可以破碎细胞提DNA
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问
小鼠骨髓原代树突状细胞一直不贴壁不长树突
汤姆卜丽波
有可能是培养基没用对或者血清不太好,你换一个试试
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问
小鼠脑立体定位注射
天一湖医者
有一些核团很小,或者深度很深,或者想要研究神经发育,往往都是胚胎小鼠,无法进行脑立体定位注射,我们可以使用跨血脑屏障型AAV病毒,只要一针注射到小鼠的腹腔或者尾静脉,AAV病毒就可以自己跨越血脑屏障,并点亮整个脑区,规避掉脑立体定位注射的难题。
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问
小鼠椎间盘蛋白提取完毕后煮沸变性为什么会有沉淀?
whilt-shirt
这种情况有可能是裂解不完全导致的
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问
【求助】细菌转化涂板后,板子变得模糊不清,像脏掉的玻璃一样。
天一湖医者
转化效率太高了,菌太多了吧,可以少涂一点试试。
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问
THP-1细胞培养过程中,经常出现贴壁现象,是怎么回事?
bamboopiggy
thp-1很挑血清的,买个好点的进口血清吧
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问
以cDNA为模板进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳条带清晰,但回收后浓度检测特别低,4ng/ul左右,且260处没有峰值,是为什么呢
汤姆卜丽波
回收的时候切胶要注意不要切到其他地方,切胶也不要紫外照太久这种就是回收没收到
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问
求救!大肠杆菌原生质体制备方法
迟C迟
1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板摇瓶中5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时6. 定时监控O.
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问
转染后出现黑色细沙颗粒
bamboopiggy
可能是你293细胞已经被支原体污染了,不转质粒的时候,变化不明显,你看不出来,建议换一株做。
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843 围观
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问
肝脏免疫荧光非特异性着色
balalaLy
绿色像是组织自体荧光,有没有做全阴性对照?就是一抗二抗都没加的。
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问
请教HUVECs可以不用ecm养吗?
澳音AY
如果是自己提取的,可以在一开始时候就尝试用更简单的培养基来养,我之前分离大鼠脑微血管内皮细胞时候用的是DMEM/F12+10%FBS+肝素钠。如果是买的公司的原代细胞建议是根据推荐的来。
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问
求助:这四个基因是怎么敲除什么意思?
bamboopiggy
在表达cd4的细胞和表达csf1r的细胞中敲除nr1h4 基因,不是四个基因
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问
裂红液会失效吗?会导致细胞死亡吗?
balalaLy
过期太久可能液体的ph改变了或者离子浓度改变导致其它细胞死亡
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问
嘌呤霉素抑制蛋白合成实验
天一湖医者
嘌呤霉素的主要作用是抑制蛋白合成,这个不好验证。
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问
0.5%的明胶封盘3天会不会由于封盘时间过长对细胞有影响?
bamboopiggy
你最好重新铺明胶,但是如果方便的话,用多聚赖氨酸比用明胶好。
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288 围观
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问
大家铁死亡抑制剂用多大的量呢?
天一湖医者
铁死亡抑制剂一般用量为5mg/kg
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问
Beas-2B细胞复苏问题
澳音AY
细胞复苏后死细胞多,可能是冻存或者保存问题。你看细胞是保存在-80冰箱还是液氮中,以及保存了多久
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733 围观
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问
可以在两个融合蛋白间的linker边上再加酶切位点吗?
天一湖医者
这个看情况,如果linker不是很长,可以在引物合成的时候直接合成进去。
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