实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问鼠源肝癌细胞H22稳转接瘤

Eason老歌迷

我的师姐就是用的我的用KM小鼠接种的腹水好像也是用在BALB/C上的，挺好的，这个不影响吧。我还直接用腹水离心以后用生理盐水清洗离心，然后体外培养的，都没有什么特别的不一样。我估计你的传代细胞有问题，没什么活性，所以长不起来。

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问小鼠成瘤后瘤子大小形状各异怎么办？

Eason老歌迷

不是所有的肿瘤都能够长的均一，形态规则的，我做了8年的肿瘤模型，接触过三四十种瘤株，能够体积均一，形态规则的瘤株不是太多。所谓肿瘤生长至一定大小是指的平均值，不可能每一只肿瘤都是一样大的，关键是控制SD不能太大，一般SD为平均值的1/3算正常，1/4就很漂亮，1/5那是极品了。一般构建肿瘤模型，裸鼠主要保证周龄，周龄小一点好。

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问coip加入beads之后要mix和wash，是直接用枪吹打好还是用vortex好？

dxy_o38ns7o8

枪吹比较好，涡旋振荡力太大容易破坏结合力阳性率降低

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问高分子材料水凝胶包埋蛋白，计算包封率时，游离的蛋白如何定量比较准确？

Eason老歌迷

我用的是差量法。蛋白质投加量减去洗涤液中的蛋白质含量（即没有包埋进去的蛋白质）。测蛋白的方法--分光光度发，我知道的有两种。一种是修正的Lorry法，另一种是考马斯亮蓝法。我用的Lorry法。

1 回答514 围观

问请问细胞长满一个T25瓶时，大概能铺几个6孔板，使每个6孔板的孔中达到合适的试验细胞密度？约每毫升10的5次方个细胞？

Eason老歌迷

一个T25的细胞瓶相当于6个培养板。铺6孔板得看接种密度和铺几块板，如接种密度为每毫升10的5次方，每孔加2毫升，一个25平方厘米的培养瓶可铺4块6孔板。

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问原代神经元培养过程中聚团脱落是为何

申东熙老伯

贴壁不牢是一种可能，是因为细胞污染。操作过程注意一下。再就是可以细胞放到培养皿的时候可以少加点培养基，在培养箱培养个三十分钟等细胞完全贴壁再加足培养基。

3 回答345 围观

问请问一下蛋白质和多糖静电结合的量怎么测？

Eason老歌迷

先把蛋白质变性去除，如用钨酸沉淀，过滤后再测多糖。

2 回答253 围观

问如何选择合适的家兔，哪些特征需要注意？

Eason老歌迷

看细节选定好具体目标后，首先要检查一下兔兔的五官有无异常，特别是眼睛，用手在兔兔的一侧晃动，观察兔兔是否有反应，兔子的正前方有视觉盲区，所以要从侧面晃;耳朵能自由转动，内侧没有明显的皮屑或痂皮;鼻子内侧呈淡粉色，没有鼻水，鼻子周围没有毛发打结或粘连;牙齿发育正常，没有弯曲或断裂;胡须无明显分叉。一只手托住小兔子的身体，把它翻过来，检查脚底板和屁股附近的毛发，确认没有打结或粪便污染;**及**周

2 回答601 围观

问请问有没有收网络药理学的期刊，没有验证实验，最好是不收APC费用的

Eason老歌迷

期刊名称：Briefings in Functional Genomics；期刊ISSN: 2041-2657；

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问免疫荧光双染抗体选择

Eason老歌迷

应该是没问题的。选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的。

4 回答418 围观

问为什么很多实验以丁酸盐处理小鼠，但是测小鼠粪便都测丁酸呢

Eason老歌迷

使用丁酸盐处理小鼠是因为丁酸盐是结肠细胞能量来源，促进小肠粘膜合成，酮体合成促进小肠细胞增殖、分化、成熟。测小鼠粪便测丁酸，是因为肠道微生物群的这些变化随后导致丁酸等保护性SCFAs的产生增加，进而触发显著的抗氧化、抗炎和屏障增强程序，从而减轻肠道炎症和损伤。

1 回答512 围观

问试剂保存：乙醇，甲醇，乙二醇，甲醛，氯仿，丙酮，氢氧化钠存放在保存柜，产生了！嗯个很难闻的味道，请教一下，这个气味是什么反应呢？

Eason老歌迷

并不是什么反应，这些化学药品都需要妥善保管，氯仿是甜味，丙酮是芳香味，可能是甲醇吧

3 回答517 围观

问大鼠取血，除了剪尾巴，还有哪些呢？要取1毫升血离心取血清做ELISA

Eason老歌迷

割尾法，鼠尾刺血法，眼眶静脉丛法，断头取血，心脏采血，颈动静脉采血，股动静脉采血等方法。

3 回答431 围观

问过滤器膜是怎么选择的呢？

Eason老歌迷

首先要考虑化学相容性，即滤膜是否耐酸、碱、有机溶剂等。常用的微孔滤膜一般是圆片滤膜，比如25mm圆片微孔滤膜，可以配合针头滤器连接注射器使用。47mm圆片微孔滤膜，可以使用换膜滤器，布氏漏斗、压力容器等配合真空泵，

4 回答592 围观

问我细胞传代不需要离心，只需要吹打成细胞悬液之后弃去部分液体，补加培养液就可以，操作很简单我步骤都是对的但是为什么我细胞状态一直？

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的传代时机选的不好，容易细胞老化。二是你的培养基缺少某些成分，或者是ph值不对。或者是你的胰酶消化过度。

3 回答917 围观

问做WB实验时遇到高背景、多条带的情况怎么办？

sophomore

首先，高背景，可能是封闭液不是新配制或者可能有其他问题，最好重新配制封闭液，5%BSA或奶粉，商品化的封闭液都可以。而多条带有出现杂带的话一般先考虑有没有抗体特异性的问题，或者是与非目标蛋白结合后，会出现杂带可能。

8 回答1926 围观

问请问一下大家，最近在做GST pull down试验，发现GST也能将我互作蛋白的his拉下，是什么原因呢？

bamboopiggy

是单纯的his？还是你的互作蛋白耦连了his？如果是耦连的，当然要跟蛋白一起被拉下来啊。

2 回答631 围观

问电泳100v，30min 120v，40min，转膜60min 封闭5小时，一抗过夜，2抗1h， lc3条带出来不直怎么办

墨幽染染

条带不均匀可能是由于配的胶不均匀导致，因此配胶时要注意配胶用的小烧杯，水，SDS，Ｔri s，等等干净无杂质，贴边角加入液体，凝固时避免大幅度动作，保证配出来的胶均匀无杂质

4 回答356 围观

问WB曝光后发现无目标条带，但内参条带比较好的原因有哪些

inventbiotech

这种情况可以说明WB操作没问题，需要考虑目标蛋白一抗，目标蛋白如果是外源性表达，需要找一下表达条件，载体。内源性表达，就需要考虑蛋白提取的时候是不是提取出来了，尤其是表达在细胞核细胞器和细胞质膜上的蛋白。提取时如果是用RIPA提取的，很容易将这些部位的蛋白丢失在RIPA的不可溶性组分里。还有一种情况就是这个目标蛋白表达丰度特别低，需要针对于所在部位进行富集再行WB检测

4 回答695 围观

问求助大家做WB电泳液和电转液重复使用几次

inventbiotech

电泳液内槽每次都是新的，外槽2-3次，电转液重复用不好吧

4 回答1523 围观

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