实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问蛋白点晶应该如何选择纯化标签

Eason老歌迷

常用的标签有6×His标签、MBP标签、GST标签、SUMO标签等。这些标签各具特色，在选择标签时，需要先了解目的蛋白和标签的特点。

2 回答480 围观

问蛋白加his单标签纯化不干净，优先考虑什么标签

bamboopiggy

你改一下洗脱液的ph试试，一般his-tag还是很好使的。

1 回答303 围观

问提取的蛋白放在冰箱-20可以反复冻融几次

dxy_amuaa0re

最好不超过5次。分装EP管减少冻融次数。

4 回答2146 围观

问COIP为啥IgG组有条带

bamboopiggy

可能你的目的条带在轻链或重链附近，所以IgG对照组也有条带

3 回答5651 围观

问紧急求助提质粒

申东熙老伯

你提的质粒是氨苄抗性的吗？如果是氨苄抗性的话，很有可能是转化后平板培养太久出现了卫星菌落，虽然有抗性但是没有质粒。

3 回答387 围观

问有没有大神做跳跃外显子形成的circ

Eason老歌迷

可能是起始外显子和终止外显子之间有多个内含子和外显子。预测环状RNA时，只能够确定起始外显子和终止外显子，却不能确定在该circRNA中间到底有哪几个外显子，而且到底包不包含内含子序列，由于可变剪切的存在，可能存在多个外显子，也可能包含内含子，是不能够准确的提取circRNA对应的序列；能够做的只是将包括起始外显子和终止外显子以及之间的所有外显子连起来作为circRNA的序列。

1 回答244 围观

问细胞铺板周围密，中间稀问题

Eason老歌迷

我之前刚开始也会有周围密集中间稀的情况，我是用下面办法改善的，不知道对你有没有用。一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个

3 回答1051 围观

问3T3-L1细胞油红染色

bamboopiggy

你的对照细胞呢？感觉染的太浅了，你的对照细胞啥样子？

1 回答439 围观

问WB和切片灌流区别

bamboopiggy

pbs的缓冲效果很好，生理盐水也可以，有哪种，用哪种吧。但是一定注意要用冷的液体，防止蛋白降解。

3 回答650 围观

问酒精性肝损伤水飞蓟素

bamboopiggy

水飞蓟素在不同溶媒中的溶解量,以PEG-400为最高,依次为乙醇、丙二醇、甘油。

1 回答432 围观

问求助，请问这个是噬菌斑吗

Eason老歌迷

不太像是噬菌斑。噬菌斑的描述，当寄主细胞被噬菌体感染后细胞裂解，在菌苔上出现的一些无色透明空斑（负菌落）。你这个更像是接种时尖锐物品误触导致的。

3 回答366 围观

问miRNA茎环法扩增不出来

秋秋欣欣

确定是引物的问题吗？可以先用别的扩增排除一下是引物还是其他东西的问题

3 回答543 围观

问seer数据库

Eason老歌迷

打开seer数据库，在SEER点击Selection, 选择Edit按钮，根据你自己的需要挑选患者资料，比如说我选择年龄为0-14岁、第一次诊断恶性肿瘤的，诊断时间为20071.1-2015.12.31，见下图。你可以选择做没做过肠镜检查的。

1 回答402 围观

问使用狗狗静脉取血实验，找不到黑皮肤狗的静脉如何解决？

bamboopiggy

要么换狗，要么凭借解剖位置找到大概，然后凭手感取。

1 回答325 围观

问小鼠太凶怎么办，C57每次抓都被咬，后面需要量瘤打药还要好多次

yanlai000

戴防咬手套🧤 ，即使咬了也没事；抓的时候把耳朵固定住

4 回答2813 围观

问ip的wash buffer是什么？需要加蛋白酶抑制剂吗？

bamboopiggy

ip的wash buffer可以用你当时裂细胞的lysis buffer，需要加蛋白酶抑制剂

3 回答1349 围观

问coip裂解液加蛋白酶抑制剂吗？磷酸酶抑制剂呢？

bamboopiggy

coip需要加蛋白酶抑制剂，但是不需要加磷酸酶抑制剂。

3 回答850 围观

问miRNA可以跑凝胶电泳吗？

bamboopiggy

可以跑，但是要用page胶，琼脂糖无法检测到。

3 回答636 围观

问无法找到家兔的动脉怎么办？

bamboopiggy

你要找家兔的什么动脉？颈总还是耳朵上的动脉？

3 回答636 围观

问请教测trpv1蛋白

TotalA

48kd 6次跨膜蛋白辣椒素受体蛋白因TRPV1,且具有热敏性，样品处理需要注意，总蛋白提取也需要注意，跨膜蛋白在使用RIPA提取总蛋白时容易丢失，可以选择新型柱式法总蛋白提取，如果条带检测弱，可以考虑进行TRPV1蛋白所在质膜的分离富集后，再行检测，WB检测可能更好。总蛋白上样每孔要30ug-40ug，电泳，转膜，封闭，一抗4度孵育过夜，二抗1小时，显影曝光就好了

3 回答630 围观

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