扩增的蛋白在5000左右，怎么扩增，为什么我的总是弥散

明显没有扩增出来，你用什么做模板进行扩增的啊？

总是出现弥散的话 可能是在PCR反应体系中一链产物的含量过高，你可以减少引物的用量，减少PCR的循环次数，在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时，其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增，一般会显示为弥散背景。

问题应该在PCR的过程,因为没有特异性的产物。

首先可以用taq酶做普通PCR，看是否有产物出现。如果有条带，说明mix 有问题；若没有特异性产物，那么模板和引物可能存在问题。对于模版，可以选个内参；对于引物，请确认序列的特异性，同时可以考虑简并引物。