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问
Western blot实验中条带中间或周围出现白圈原因是什么?
Eason老歌迷
可能是你转膜时,你膜和胶之间有气泡没有赶干净。
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问
WB蛋白提取的相关问题
Eason老歌迷
6孔板一般我是一个孔加100ul的裂解液。
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问
western blot试验中如何提高磷酸化抗体的检测质量?
Eason老歌迷
可以在提蛋白时,加磷酸酶抑制剂。然后可以延长封闭时间,调整一抗浓度。
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问
WB条带乱七八糟,不知道是不是一抗的原因,新买的affinity的
balalaLy
条带挺清楚的,抗体没有问题,但条带比较宽,比较弥散,说明loading buffer不是很好,没能把蛋白压缩得很好,右边的条带有黑点有点歪,wb过程中用到的各种缓冲液尽量保证干净
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问
跑wb的时候条带总是不完美 笑脸😊一样的条带怎么回事
balalaLy
page胶凝的不好,或者是样品中有杂质
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问
蛋白质实验中选择抗体问题
秋秋欣欣
一抗建议选择兔源的好一些,稳定一些,二抗就根据一抗选就行
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问
请问,WB中转膜设备是制冰机的冰来进行降温合适还是直接放冰箱冷藏合适,放冰箱会不会温度太高导致转膜效果不好?
秋秋欣欣
用制冰器的冰来降温就可以了,这样温度更低,还可以在转膜器里放冰袋
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问
如何消除颜色对蛋白浓度结果的影响?
天一湖医者
用三路甲烷或乙醚萃取试试。或者稀释样品后做,去色素,过柱就可以了
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问
组织样本Wb内参跑不出来
天一湖医者
可能是因为一抗浓度过低吧,可以试试用1:500的一抗浓度,二抗用的1:2000试试看
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问
请问大佬们,条带突然有很大的黑点是啥情况呀
balalaLy
转膜液脏了,或者封闭液没有溶解好,洗膜的时候可以洗久一点或者换多两次洗膜液
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问
想问一下跑出来的GAPDH背景很黑,会不会跟蛋白提取有关?
秋秋欣欣
背景黑的话应该不是跟蛋白提取有关,应该跟封闭或者抗体的问题
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问
准备跑WB的蛋白煮过以后冻了3个月-20℃,再次拿来跑上样量需要多加吗?蛋白浓度会变化吗?
秋秋欣欣
-20三个月的话蛋白可能会有些降解了,大概20-30ug上样量先跑看看
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问
胶的浓度与已知目的蛋白分子量,怎么确定用什么浓度的胶呢。。我们目前买的是固定比例的啊
太阳阳了
10%最常用,如果你跑的蛋白差距特别特别大的话也可以用梯度胶
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问
IP实验阴性对照组IgG有目标条带,但是由于我的蛋白带有V5标签同时曝光V5阴性对照则没有条带,而用目的蛋白的抗体阴性对照有条带
balalaLy
可能是抗体非特异识别IgG,用标签蛋白就好了
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问
有没有比较懂流式的大佬呀,救救孩子吧,实在搞不懂了
Eason老歌迷
不同的仪器具有不同的设置,接收荧光素的通道可能存在不同。现有流式细胞仪配备的激光器种类主要为488nm、638nm、561nm和405nm,也有355nm或者375nm、532nm和808nm等。有的流式细胞仪只配备488nm;有的流式细胞仪配备两种激光器如488nm与638nm。为了扩展流式多色检测能力,有些流式细胞仪同时配备488nm、638nm和561nm等。
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问
间充质干细胞与氧化损伤细胞共培养
balalaLy
这个得做预实验,两种方法都试一下,哪种有效挑哪个。
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问
鸡胚和鸡细胞的引物用的都是chicken源的吗
秋秋欣欣
鸡胚,鸡细胞,鸡的就要用chicken源的引物
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问
怎么查询某个基因座能够编码多少个氨基酸,翻译多少个蛋白质呢?
天一湖医者
第一,上ncbi检测有没有同源序列。第二,构建载体,转入过量表达看效果。第三,据此推测出蛋白序列,人工合成看效果。
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问
用超滤管浓缩分泌蛋白时容易堵怎么办?
Eason老歌迷
必须进行定期冲洗,以保持一定的透过量,并能延长膜的使寿命。一般在规定的料液和压力下,在允许的pH值范围内,温度不超过60。C时,超滤膜可使用12-18个月。如膜清洗不佳,回使膜的寿命缩短。如果堵得比较厉害,还可以在NaOH溶液中加点NaClO效果会更好,洗膜的时候最好用热的溶液。
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问
microRNA minics转染失败
Eason老歌迷
最好先用一个荧光标记的阴性对照做一个转染条件的摸索。
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