实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问如何选择合适的分子伴侣

Eason老歌迷

我认为需要根据你要表达的真核蛋白的特性去选择相应的分子伴侣。常用的分子伴侣有Trx、GST、DsbA等，它们使得许多外源基因能在E.coli里正确折叠，如IL—11、IGFBP－3、INF、 Insulin甚至包括结构复杂的tPA等均可获得正确折叠的重组可溶性活性蛋白。

1 回答925 围观

问内参(β-actin)出现多条带，如何判断哪条带才是actin？

Eason老歌迷

我们都是很清晰的一个条带，因为内参很好跑。你要说内参为啥多条带，如果要是让我想原因的话，我觉得很可能是loading buffer 里面的DTT可能变质了。

4 回答3956 围观

问内参总是跑不齐该怎么办？

Eason老歌迷

一个是你要确保你的上样量是一样的。然后配胶一定要混匀。还可能是你跑胶时电压设置的问题。

5 回答1916 围观

问膜蛋白长时间超声裂解是否影响蛋白质酶活等功能？

balalaLy

长时间超声裂解会导致裂解液温度升高加速蛋白降解，同时超声也会导致蛋白质构象的改变。影响蛋白功能

3 回答2980 围观

问WB转膜后pvdf膜保存。

府宅

一般常用膜保存液的配方为：水﹕甘油﹕亚硫酸氢钠=79﹕20﹕1保存液温度在5~40℃

4 回答2902 围观

问质谱检测到的蛋白质翻译后修饰差异，免疫沉淀无法成功验证怎么办？

Eason老歌迷

目标蛋白的PTMs研究通常需要一个富集步骤，因为修饰蛋白的丰度一般较低。大多数PTMs检测方法都是结合富集策略开发的，以最佳识别、验证和研究目标蛋白中PTMs的功能。你可以提高纯化浓度。

3 回答261 围观

问免疫沉淀IgG出现条带怎么改进？

Eason老歌迷

珠子少加点，wb抗体稀一点，曝光时间短一点。珠子抗体这些不要贪多，不然容易有非特异性条带

3 回答995 围观

问请问各位前辈条带反白是什么原因导致的

Eason老歌迷

你这是二抗孵育时间太长了，你下次缩短一点孵育时间看看。

3 回答683 围观

问有个比较奇怪的问题，请问同样用10%的胶跑了两个分子量都是十几的目的蛋白，称为A和B，为什么A蛋白条带很粗，而B蛋白条带正常

bamboopiggy

可能你a蛋白的表达量高啊，b蛋白的表达量一般

4 回答196 围观

问请问，为何细胞里和组织里相同蛋白跑出来的位置不一样? 所配的胶等步骤都是一样，而且重复过很多次。

bamboopiggy

你细胞和你的组织是一个种属的？是同一个器官的？不同器官收的蛋白样，可能跑的位置也不一样。

3 回答372 围观

问蛋白显影拍出来黑乎乎，不明显是什么原因？

Eason老歌迷

可能是你的封闭时间太短了。也可能是你的抗体浓度太高了，或者孵育时间太长了。

5 回答299 围观

问为什么有时候WB显影出来的结果跟说明书上的不同？

Eason老歌迷

因为实验条件不一样，肯定会有或多或少的差别，只要不是太大就行。

4 回答344 围观

问目前脱脂奶粉封闭，条带背景不是很干净，封闭时究竟是选脱脂奶粉、BSA还是商品化的快速封闭液更好呢？

Eason老歌迷

我觉得脱脂奶粉效果更好，你可以封闭时间长一点，这样会更干净。

4 回答896 围观

问为什么同一个指标，不同公司的抗体条带位置不一样，有四十几，有五十几版本，如果两个抗体一起孵，不得有两个目的条带吗？

Eason老歌迷

不同公司的抗体，肯定是多多少少有点不一样。如果你两个抗体一起孵，不会有两个条带，但是可能会有一个宽的连在一起的条带。

3 回答1555 围观

问为什么会跑出说明书以外的很多杂带

Eason老歌迷

封闭时间不足。或者是你选的抗体特异性不高。

4 回答251 围观

问CCK8

府宅

CCK-8的OD值处在1.0左右是比较好的检测结果，对后续实验的稳定性有益

3 回答3372 围观

问想问问这样种板均匀吗，细胞数目会不会过多？

balalaLy

种板还算均匀，但细胞数就有点多了，24h后都长很满了，细胞太满，一个是你要弃液再加药这个过程容易使细胞脱落，另一个是细胞太密影响药物作用，再加上本身细胞接触抑制，这都会造成你的实验出现误差。

2 回答480 围观

问真菌中的蛋白提蛋白过程中，留在上清的蛋白很少，通过WB甚至检测不出来，怎么做Coip？

秋秋欣欣

蛋白较少的还你就需要提高蛋白浓度，充分裂解，扩大真菌量

2 回答343 围观

问western 电泳后前两块胶在marker 左侧又泳出了marker 条带，而后两块胶没有问题，电泳液都是现配后预冷

balalaLy

第一个孔什么都没加的话旁边的会溢散过来，所以最好是加适量的loading buffer

4 回答280 围观

问请问侵袭实验，铺板36小时后，小室内有一坨坨的东西呢？

balalaLy

应该是上室的聚在一起的细胞，不影响结果的

3 回答455 围观

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