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问
wb实验求教
Eason老歌迷
你转膜时间不够,大蛋白比较难转,时间可以稍微延长,我用的湿转都是180ma,120分钟,完全能转上嘎嘎清楚。
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问
求助/fluo-8am染料会淬灭吗?
Eason老歌迷
会。光照射是致荧光淬灭的最常见原因,光照射也会促进激发态分子与其他分子相互作用而引起碰撞,使荧光淬灭。溶剂种类、pH值及温度等环境条件的不同也会让淬灭发生。
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问
PAS染色求助
Eason老歌迷
感觉是你的染色不均匀导致的,因为正常应该都会有的。
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问
求助 | 给药之后p-Akt变化不明显,t-Akt表达减少明显
Eason老歌迷
我也遇到过,实际实验和预想实验结果不同,甚至相反,建议你多做几个重复,看看是不是偶然事件。
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问
跑蛋白的条带较为弥散 是什么原因造成的
Eason老歌迷
wb条带弥散,可能有以下原因:一个是你的上样速度太慢了,弥散了。二个是电泳胶的浓度选择不对。
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问
Bcl2一直孵不出来,用的是CST的15071,试过重新配一抗,但是还是出不来,有什么建议吗?
Eason老歌迷
你有没有用丽春红染,有没有条带。如果真出不来,你可以换一种抗体试一试。
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问
一直长不出噬斑,有无懂行大佬了解此类情况
Eason老歌迷
所用细菌是否正确?也就是是否是lamda噬菌体的宿主菌。NZY top是否够好?温度太高?浓度也就是营养不行?PH对么?培养时间是否足够长?培养温度是否合适?噬菌体活力是否够,也就是文库保存不当的话,噬菌体已经没活力了。测测,增大噬菌体的量再培养看看。培养的时候,适当将噬菌体和宿主菌先放37°孵育半小时,也许会好一点,增加粘附,侵入。
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问
蛋白质提取的浓度怎么确定
迟C迟
可以用紫外分光光度计直接测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液,此操作简便,测定迅速,不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
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问
双荧光素酶测定目的基因的突变体不受某个调控基因的影响
Eason老歌迷
我觉得还是用cmv启动子比较好。
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问
YTHDF2蛋白无条带
dxy_lgbve3zq
没有条带的原因有很多。你可以先用丽春红染膜,看在对应的位置有没有你要的条带,如果有,那就是抗体的问题或者曝光操作的问题。如果没有,那可能是上样量太低,转膜不成功,蛋白降解的问题。你也可以全膜摸一下这个目的蛋白的位置,因为有时候目的蛋白的位置和说明书上的不一定完全一致。
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314 围观
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问
加甲酰胺的作用是什么,只加尿素变性可以吗?
Eason老歌迷
尿素和甲酰胺,它们可与碱基间形成氢键。
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问
电泳的marker师姐说要加中间不能加两边,有什么原因吗?
VisionPanMMCS
最边上的胶可能均匀性不好,跑出来会歪掉
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827 围观
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问
WB实验中的转膜缓冲液该如何配制?在文献中有看到不一样的配方
whilt-shirt
我们实验室是tris3.03g,甘氨酸14.4g,加双蒸水至800ml,然后再加200ml的甲醇
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问
Western-blot实验制胶时好多泡泡怎么办?
dxy_h96fmgnq
你多配一点,然后吸的时候吸取澄清部分就行
8 回答
1378 围观
8 回答
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问
western blot 实验怎样做内参照?
还在陆上surg
根据样本和目的蛋白分子量选择合适的内参。
5 回答
1028 围观
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问
western blot试验中如何判断样品总蛋白的提取是否成功?
秋秋欣欣
蛋白提取后煮沸前可测定蛋白浓度判断蛋白提取浓度,或者变性后跑胶考马斯亮蓝染色或者转膜后丽春红染色判断
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703 围观
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问
WB萌新求救
dxy_lgbve3zq
是上样量不一样吧,哪儿有问题呀
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684 围观
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问
求助|B16F10细胞培养
bamboopiggy
感觉你这株细胞死了,可能冻存过程或复苏过程有问题
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问
transwell小室重复利用
bamboopiggy
corning的可以,bd的不行。但是小室不建议反复用,孔径会改变
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问
做细胞周期实验 6孔板用药加多少量 贴壁细胞lx-2每孔100w个细胞
bamboopiggy
看你加什么药啊,查一下别人用过的药物浓度和作用时间
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