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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
细胞BSA蛋白定量怎么调整啊,每次跑出来条带都歪?
天一湖医者
我觉得有两种可能:一、做胶时没有充分混匀二,上样buffer 可能有问题
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问
wb同样的蛋白样品,跑三块胶,为什么有的内参齐,有的内参不齐?
天一湖医者
一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
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问
乳剂状疫苗如何提核酸。
天一湖医者
乳剂状疫苗可以用离心柱法提核酸。
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问
小白做+WB
天一湖医者
减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间和温度
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问
WB条带连一起是什么原因?
天一湖医者
wb时连成一条线可能有以下几种原因:1)上样量过大 这里指的是质量数过大,一般上样在20-100ug之间就可以,楼主可以减半上样量,试试看。2)一抗孵育时间过长,适当缩短孵育时间,也可以改善。3)一抗浓度过大 ,抗体如果很好用的话,增大稀释比例试试。4)曝光时间过长,同样会由此现象。但是这其中,上样量影响最大,建议楼主其他条件不动,减少上样量试试,可以减少一半。
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问
WB背景很脏怎么办?
申东熙老伯
封闭久一点,可以用牛奶4℃封闭过夜,降低一抗浓度。
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问
WB 转膜后的pvdf 膜保存。
秋秋欣欣
放在TBST 里4度保存,几天没有问题
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问
提取内质网沉淀如何非变性溶解?
天一湖医者
在提取后的蛋白沉淀中加入适当量的溶解液,加入溶解液的体积需要根据蛋白沉淀的大小以及下游实验所需的蛋白浓度决定。
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问
免疫组化结果到底准不准?感觉DAB多染一会儿就阳性了
秋秋欣欣
免疫组化结果准啊,采图的时候肯定要对比着采图对照和阳性都需要看到,才能具有说服力
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问
酵母双杂交Y2H在四缺培养基上有自激活的话,意味着就是自激活吗?
Eason老歌迷
是的是的。一般检测自激活就是将已知基因构建到可以表达BD结合结构域的载体上,表达形成融合诱饵蛋白(bait),将目标基因构建到可以表达AD激活结构域的载体上,表达形成融合猎物蛋白(prey)。如果诱饵蛋白和猎物蛋白发生互作,BD结合结构域和AD激活结构域在空间上极为接近,GAL4转录因子发生重构,恢复了转录因子的功能,可以激活报告基因的表达。通过检测报告基因的表达与否,从而推测猎物蛋白和诱饵蛋白是
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问
trasnswell铺胶不均
秋秋欣欣
铺胶不均可以铺进去之后轻震几下
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问
求助wb不出条带
Ryan_J
我们用的都是实验专用的脱脂牛奶,还有二抗可以降低些,不知道你的推荐浓度是多少,二抗我都是1:10000
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问
请问慢病毒感染细胞24h后换液加抗生素筛选细胞大片脱落的原因是?
balalaLy
我一般是24小时如果状态太差就换液,换液后第二天才加抗生素。如果状态好就补几ml培养基继续培养到第二上午换液,下午加抗生素。如果还是死很多细胞说明转染失败,重新包病毒吧
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问
wb中的磷酸化蛋白要怎么跑,有没有什么特殊技巧,能跑的好看
秋秋欣欣
磷酸化的蛋白封闭的时候最好用5%BSA
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问
枸杞木虱qPCR选择内参应该用什么啊? 急!!在线等!!
dxy_gwrp7ndq
ICG 数据库中收集了文献报道的各物种、组织细胞适用的内参基因。
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问
困境-想研究脊髓神经元,但是缺乏脊髓神经元的细胞系(小鼠)
Eason老歌迷
有这篇文章,你可以参考一下。’大鼠海马神经元与小鼠脊髓发育过程中神经递质属性可塑性的研究’这篇文章是中科院一个研究生的。
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问
细胞污染还是正常状态?求指点
秋秋欣欣
看你细胞状态挺好的,应该不是污染,可能就是培养基里的一些蛋白质
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问
wb检测,使用B-actin归一化,还是使用用蛋白归一化准确?
秋秋欣欣
Wb检测应该使用内参归一化,可以是beta-actin
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问
转膜时没有气泡,为什么显影的时候会有像气泡一样的空泡而且很大,确定不可能是转膜时有的
Eason老歌迷
转膜没有气泡,可能就是你敷抗体的时候出了问题,是不是你有一部分膜抗体没孵上啊。
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问
CRISPR敲除导致基因组非目的基因丢失怎么办?
Eason老歌迷
我建议你如果有很多基因丢失,你必须要再做一次了。crispr方法会产生丢失现象,具体参看这篇文章,Paul Q. Thomas 等人在 Nature 发表的一篇题为:Large deletions induced by Cas9 cleavage 论文显示,CRISPR/Cas9切割后小鼠受精卵中出现频繁的大量碱基缺失(千碱基量级)
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