用红细胞裂解液裂解人外周血红细胞，离心后没有白色沉淀

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dxy_9d3ayzq8

2022-07-13

我做的是外周血的T淋巴细胞分型，主要是检测th1/th2/th17等亚型。需要裂红后固定染色。

我用的是400ul的血，加入刺激剂后，培养箱刺激5小时，拿出来加入4ml 1×红裂液，冰上裂解15min，然后450g离心10min。正常离心完我应该能看到管底白色的白细胞沉淀，但是却看不着，这是为什么？我之前试过先裂红，再刺激，裂红的时候的确能看到下面的白色沉淀，但是裂红后，刺激5小时之后，在用fbs洗的时候，白色沉淀变成白色的膜一样的东西，用枪头吹打不开。这又是为啥？

问题：全血和红细胞裂解液的比例到底怎么配呀，裂红在一个什么条件下合适呢？裂红后离心条件呢？

1 个回答

Eason老歌迷

2022-07-15

有帮助

第一个问题:红细胞裂解液（Tris-NH4Cl）的配制比例和方法:称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷（Tris）1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后，混匀静止4-5分钟，待红细胞完全破碎，1000r/min离心5分钟，弃上清去除红细胞，得到白细胞沉淀。

第二个问题:我觉得你的离心力不够，或者是你提的细胞量太少了。