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SDS-PAGE蛋白定量问题?
whilt-shirt
没有用过赛智的软件,一般都是用image j软件分析灰度值
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问
蛋白质凝胶电泳的问题?
whilt-shirt
有可能是loding有问题,建议重新换个loding试试
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问
求助大家,我的细胞是污染了吗?
Eason老歌迷
是的啊,有点像。细胞污染一般你可以先拿显微镜看看,看看有没有游动和混浊。然后可能是细菌,支原体,真菌,黑胶虫污染。
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问
细胞实验酮类药物溶于0.1%DMSO中,需要设置对照组吗
Eason老歌迷
需要啊!你的药物溶于dmso,那么对照就是0.1%的dmso就行。
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问
wb出现2个条带怎么回事?
bamboopiggy
可能是抗体不特异,可能是胶的浓度出现问题,也可能是buffer的问题,或者有的蛋白就是两条带,如果LC3B
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问
WB的样品变性后可以在4℃放吗?大概能放多久
bamboopiggy
我放过4度,overnight没问题,估计放一周问题不大
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问
关于WB灰度值量化为柱状图的疑惑
Eason老歌迷
这两个没啥区别,都可以用。灰度直方图实质就是一个大小为256的数组,数组的下标为0 ~ 255,分别代表了图像采样量化后从0 ~ 255的每个灰度级。计算灰度直方图,其实就是通过遍历图像的每个像素点,统计0 ~ 255的每个灰度级在图像中出现的次数,而统计后的总次数或者归一化后的频率就作为这个数组对应下标的元素取值。
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问
今天跑的wb又歪条带之间也没有分开,是什么原因呢
麻黄连翘赤小豆
歪可能是胶灌的不均匀,没分开可能是跑的时间太短,没跑开
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问
蛋白泳道黑
麻黄连翘赤小豆
感觉像蛋白降解的问题,重新提蛋白再看看
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问
细菌刺激细胞
Eason老歌迷
一般放回细胞培养箱培养,如果你做好消毒,操作得当,一般不会造成污染的。
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问
缬沙坦作用于细胞,用什么试剂溶解合适
Eason老歌迷
看你用什么实验了,如果是mtt,cck8就可以用dmso溶解。如果是加药,用血清培养基即可。你的浓度设定一般是按照你的实验目的来设计的,最好是先预实验,确定一个大概的范围。
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问
用红细胞裂解液裂解人外周血红细胞,离心后没有白色沉淀
Eason老歌迷
第一个问题:红细胞裂解液(Tris-NH4Cl)的配制比例和方法:称取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)1.3g加水溶解并稀释至500ml。0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后,混匀静止4-5分钟,待红细胞完全破碎,1000r/min离心5分钟,弃上清去除红细胞,得到白细胞沉淀。第二个问题:我觉得你的离心力不够,或者是你提的细胞量太少了。
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问
大家帮忙看看这个中间空泡是什么?
Eason老歌迷
如果不在细胞内在细胞外的话,可能是酵母菌等真菌污染。
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问
求助 siha细胞
Eason老歌迷
我也遇到过这种情况,应该是细胞污染了,你先养养看状态,在做处理。
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问
X-tile数据解读
Eason老歌迷
是的,p值肯定是小于0.05的才靠谱
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问
实验分析题
Eason老歌迷
问题1:减低,共价问题2:周期蛋白依赖性激酶是细胞周期的关键调节因子,通过与细胞周期蛋白D(cyclin D)形成复合物,可磷酸化视网膜母细胞瘤基因(Rb)继而释放转录因子E2F,促进细胞周期相关基因的转录,使细胞进入S期。
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问
请大佬指导一下!好人一生平安!
Eason老歌迷
那你就按照你设计的时间来加,你第一天下午去,下面的就是早晨和晚上来加药。
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问
WB实验内参经常性出现不齐,重新定量后也会有同样的情况,怎么解决?
麻黄连翘赤小豆
每次上样前可以试一下把蛋白摇一下,长时间冻融可能会导致管子里面蛋白不均匀
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问
关于高GC模板(>65%)PCR扩增
Eason老歌迷
PCRx Enhancer Solution有助于扩增GC丰富序列,可以提高引物结合的特异性和Taq酶的热稳定性,并且便于镁离子浓度和退火温度的优化选择。我之前扩增一段GC比70%的序列,可能还有二级结构,用了多个厂家的DNA聚合酶均扩不出条带,改用Platinum Taq DNA聚合酶后,当PCRx Enhancer Solution添加到浓度为3×时得到了很漂亮的结果。
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问
细胞因子干粉重构后的保存时间
Eason老歌迷
一般4℃可稳定储存4-7天,要是存放于-20℃,可稳定保存至少三个月。
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