实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

问WB曝光时间为什么不一样

Eason老歌迷

没事，正常现象，wb显影可以据信号的强弱适当调整曝光时间，你选一个显影效果最佳的时间即可。可能是你的抗体用时间长了的问题，或者你没有放-20℃保存好

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问请问细胞合成酪蛋白至少需要几种氨基酸？无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白吗？

Eason老歌迷

酪蛋白的氨基酸序列在网上都可以查到，你可以去ncbi上查一下，它需要多少种氨基酸。无血清高糖培养环境中细胞能够合成酪蛋白。

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问单克隆抗体细胞融合求救

Eason老歌迷

有，有好几个!论文上人家发的也是挑选的最好看的，你这个已经做出来融合了。

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问流式分析得到这样的图，该怎么解决。

Eason老歌迷

有几个原因，可能是你没有正确的使用活性染料。可能是没有正确地设置PMT电压。

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问细胞焦亡与NLRP3

Eason老歌迷

细胞焦亡并不一定会伴随NLRP3表达升高。

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问求助，percoll分离骨骼肌干细胞不分层

Eason老歌迷

我是这样操作的，你可以参考一下。1.用percol将10XPBS稀释为1X （得到的我们暂且称100% Buffer A好了）2.再用无血清的培基去稀释100% Buffer A为2份，一份为75% Buffer A，另一位为35% Buffer A3.肝脏细胞离心后得到沉淀，去除上清后，先用35% 的Buffer将其冲悬，接着用移液将75%的Buffer缓慢从底部打出，期间可以看到75%与35

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问无外泌体培养基

Eason老歌迷

这个好像和无外泌体培养基没有关系。你可以比较新培养液与原培养液成分，检查细胞是否存在污染，是不是传代时机不对细胞发生老化。

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问阳性杂交瘤细胞培养

Eason老歌迷

你这个明显是细胞污染了，你可以先用显微镜观察，看看它有没有游动，我感觉是真菌污染。

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问求助：小鼠mcao模型

Eason老歌迷

可以给你分享几个我当时做实验总结下来的小技巧。一是线栓不可过硬。过硬线栓容易找手感，但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管，导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态，当线栓插入血管以后，因为线栓过硬，血管肌张力无法使得线栓改变形态，只能被线栓改变形态，导致血管处于紧绷状态，对于再灌注操作不利。二是选择硅胶头尽可能接近圆柱形的线栓，这样当线栓进入MCA外后，能够完全堵塞MCA，而不会出现缝隙，使得线栓

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问vx2荷瘤兔接种问题

Eason老歌迷

我个人更喜欢组织块方法，它虽然慢一些，但是成瘤快一些，而且效果也很好。

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问求助如何降低2-VO大鼠模型死亡率

Eason老歌迷

如死亡过高，造模可分次进行，逐渐加量摸索为宜。

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问甘氨石胆酸灌胃大鼠模型

Eason老歌迷

做过，8mg/ml，0.25ml灌胃

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问什么会引起生发中心个数变多呢？

天一湖医者

影响生发中心形成的因素： ①B细胞趋化因子受体(BLR)：前已述及，激活的B细胞受趋化因子吸引，从T细胞区迁移到淋巴滤泡，条件是必须表达BLR受体CXCR5。缺失BLR的小鼠，其活化B细胞只能停留在胸腺依赖区和边缘区，不形成生发中心。②TNF及TNF受体：已知TNF-α、淋巴毒素α／β(LT-α／lT-β)及相应的受体TNFRl均与初级滤泡和生发中心形成有关。因为敲除TNF、LT-a／LTβ或TN

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问各位大佬，抗菌肽冻干怎么溶解？

Eason老歌迷

使用无菌蒸馏水或去离子水，当然无氧水。多肽溶液可能遇到细菌降解，为防止此情况的发生，应溶解在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化，应溶于无氧的水中。

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问原核诱导蛋白，相关问题求助？

Eason老歌迷

诱导的蛋白只在沉淀中，上清中没有，这个现象很正常，我也遇到过。你可以提前去biotech上查看预测蛋白可溶性问题。在或者看你的外源蛋白是否含有稀有密码子，如果有的话建议使用Rosetta表达菌株。

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问小鼠MCAO行为学评分

天一湖医者

adhesive removing的胶带选择3M的就可以。

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问是染噬菌体了嘛

天一湖医者

那应该是细胞碎片，或者菌碳化了，很正常的，可以进行清洗。

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问求助：基因命名

dxy_gwrp7ndq

同源基因命名(1)在不同脊椎动物中的同源基因应有相同的命名。(2)如果一个基因先在其它物种中发现, 然后发现它在人中的同源基因, 则人的基因不应以H开头予以命名。(3) 为了区分来自不同物种的同源基因, 可在基因符号前加由人类细胞遗传学标准化委员会(Committee on Standardization in Human Cytogenetics)制定的三字母代码(物种缩写表请查阅网页http：

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问质粒表达和染色体表达有什么区别

dxy_gwrp7ndq

这是由于染色体DNA携带的基因所编码的产物，在细菌新陈代谢中是生存所必须者；而质粒携带的基因所编码的产物并非细菌的生存所必须者。因此质粒可以在细菌间传递与丢失

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问怎么找或者预测谷氨酸棒杆菌某氨基酸转运蛋白呢

府宅

可以通过上调氨基酸水平应用实时定量PCR证明其是否受存在转运蛋白。再利用绿色荧光蛋白与其构建融合蛋白,确定转运蛋白所在部位。

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