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RAW264.7巨噬细胞极化qPCR内参
bamboopiggy
raw264.7跑realitme pcr ,文献里有人用gapdh,有人用actin,我一般用gapdh
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问
胰酶污染的话有什么表现吗,怎么判断
天一湖医者
胰酶污染的话表现:胰酶浑浊,色黄(偏酸),有臭味儿,镜下见到球菌。
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问
PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB相关疑问?
天一湖医者
一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的,我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看,我觉得大概已经出来了有几个下调的,整体上抑制这个通路
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问
蛋白电泳问题
bamboopiggy
你蛋白浓度感觉有点低,浓缩胶有点短,没把条带压好
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问
琼脂糖PCR凝胶电泳失败求助
balalaLy
这种涂抹状的条带一般是样品降解了
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问
MRC-5污染
天一湖医者
从图片上看,应该是细菌污染了。
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问
细胞加药-药物浓度
balalaLy
这要看两种细胞对这种药物的耐受程度。但是呢会有一定的参考价值。可以在A细胞的有效作用浓度为参考进行预实验。
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问
请问给大鼠测尿液,除了代谢笼,请问怎样收集尿液测呢?
dxy_gwrp7ndq
可以使用强制排尿法,可以将大鼠固定好后,按压骶骨两侧的腰背部或者轻轻压迫膀胱的体表部位,使其排尿后,将尿液收集到预先准备好的平皿或铝箔容器中
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问
Caco-2细胞 几天分化几天长满?
天一湖医者
Caco-2细胞生长良好时5天左右长满。
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问
急求大佬解决qpcr问题
Eason老歌迷
可能还是你的体系问题。我的经验,在20 ul 的逆转录系统中加入1 ug RNA。然后将cDNA稀释50到100倍,(即1 ul的RT产物加49 ul 水),取 2ul 用于qRT-PCR (20 ul 体系)。GAPDH的Ct 值在19~20范围内。
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问
请问巢氏PCR与普通PCR相比有哪些优点?
府宅
巢式PCR操作简单,所需条件与常规PCR相同,但与常规PCR相比进一步提高了反应的特异性与灵敏性,在微生物学、生物信息学、生物医学等方面有着极其广泛的应用。例如巢式PCR技术与RFLP(限制性片段长度多态性)技术结合,通过设计高度保守序列的引物对待检物种DNA进行PCR扩增,对PCR产物进行RFLP分析,从而完成DNA分子水平上的多态性检测,该法常用于流行病学的调查和临床常规检测。
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问
双酶切鉴定实验有目的条带,但是底部也出现非特异性条带。
Eason老歌迷
可能是出现了非特异性酶切。你确认一下有没有下列情况发生:1.限制性内切酶在你使用的buffer体系中存在非特异性酶切的情况。2.酶切时间过长,我试过最长切过8小时,有一些内切酶会出现这种情况了。3.配的酶切体系当中,酶的体积超过了总体积的10%,过量的甘油会影响。4.酶切温度不对,不是所有的酶都是在37℃下工作,同样,检查一下你的水浴锅的显示温度和实际温度是否一致。
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问
shRNA设计
Eason老歌迷
不需要去掉,siRNA序列最后两个碱基TT不需要去掉。shRNA包括两个短反向重复序列,在活体中输送“小干扰RNA”(siRNA)的一种办法是,将siRNA序列作为“shRNA”克隆进质粒载体。
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问
Caco-2细胞 Gibco血清
Eason老歌迷
你可以在细胞分离和传代中使用选择性培养基试一试,我之前试过效果挺好。
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397 围观
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问
RNA提取液(25:24:1,PH<5.0)的提取效果及使用方法
Eason老歌迷
rna提取液的提取效果很好,具体使用方法和trizol法差不多。苯酚使蛋白质变性,同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相与液相分层,去除核由于苯酚与水有一定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱和酚中含10%左右的水分),因此不会丢失样品
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问
P-JNK P-P65蛋白在细胞哪一部位表达?
bamboopiggy
去genecard上去看,这两个蛋白的说明,里面有图,标出来这俩蛋白的表达位置
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问
LPS时而有效时而无效是什么原因呢?
Eason老歌迷
你的浓度太大了,建议你做一个预实验,找到一个合适的浓度区间。
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问
求问 脂肪组织石蜡切片HE染色步骤
balalaLy
切好片捞片的时候贴平整,烤片时间一定要够,还有就是如果是间隔一段时间再做染色的一定要二次烤片。
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问
求助!为什么低浓度的化疗药物竟然比不加药的对照组OD值大
balalaLy
我发现大多数的药物都是这样,在低浓度的不仅没有细胞毒性反而能起到一定的增殖效果。就是单纯的DMSO在较低浓度时也有这样的效果。所以如果你要做化疗药物的细胞毒性作用的话还是要选择IC50相近的浓度可能才会有比较好的结果。
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问
求助😭以前取的小鼠心脏,没有灌注,直接-80冻了,现在要做切片并且提RNA和蛋白,请问里面的血液影响大吗?要怎么消除影响?
bamboopiggy
不灌注固定,血液对冰冻切片影响大,你这个组织不适合做切片了,提rna和蛋白尽量只取心肌影响就不大
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