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科研学霸天团,48小时有问必答
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WB曝光时间为什么不一样
Eason老歌迷
没事,正常现象,wb显影可以据信号的强弱适当调整曝光时间,你选一个显影效果最佳的时间即可。可能是你的抗体用时间长了的问题,或者你没有放-20℃保存好
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问
蛋白质拓扑结构示意图绘制
bamboopiggy
这个可以用AI,自己画,如果你已经知道你的蛋白的结构的话
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问
HIF-1α蛋白纯化!!!
Eason老歌迷
做过,可以做出来。但是吧,GST融合蛋白容易氧化形成二聚体,影响纯化效果,所以经常会在结合及洗脱缓冲液中添加1-10mM DTT,效果才会好。
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问
生长曲线 细胞
bamboopiggy
这个看你测细胞浓度用的是什么方法,如果是cck8/mtt的话,如果你的酶标仪在无菌环境中的话,你可以用一块板。如果是在普通环境,你就需要一块板,一个时间点
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问
低丰度蛋白跑western blot
whilt-shirt
增加上样量至10-20ul,一抗稀释比例提高到1:500试试
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问
慢病毒转染细胞死亡
Eason老歌迷
一个是调整细胞状态,感染时使用对数期的细胞:增加细胞膜的流动性。二个是降低感染时血清浓度,使用无血清/低血清的培养基:降低血清蛋白对病毒外壳蛋白的封闭。三,你是不是使用了Polybrene,Polybrene本身就具有细胞毒性,部分细胞对Polybrene敏感,容易导致细胞状态变差、形态发生变化、甚至死亡。
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问
小鼠血清能用PBS稀释吗?
whilt-shirt
PBS是等渗溶液,理论上是可以的
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问
停跳液配方
whilt-shirt
可以参考一下这个,应该差不了太多
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问
小鼠离体心脏灌流
bamboopiggy
你的实验目的是什么呢?根据你的实验目的来决定什么时间加CaCl2
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问
cck8测增值,实验组和对照组细胞数总是不一样,该怎么处理,,结果怎么分析
bamboopiggy
实验组和对照组的0天,可以作为1,然后后面的每天和0天比。当然如果初始铺细胞差太多,这个结果就不可信了。初始铺细胞,测细胞浓度的时候,建议弄到一个数量级,起始的细胞数就不会差太多。
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问
平板上取菌到液体培养基上的问题
bamboopiggy
你摇菌的目的是什么?如果是为了取到足够的菌,你可以做预实验试试,看5ml够不够,如果不够可以扩大到10ml啊
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问
求细胞生长曲线
whilt-shirt
之前养过一段时间,还是比较好养的,平均3-4天传一次代
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问
胶回收浓度低,但看着胶图很亮,提出来浓度在1-7ng/ul
balalaLy
溶胶的时候可以涡旋一下,促进溶解,最后一步加buffer溶解核酸时可以把buffer 50度预热一下,提高溶解度
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问
求助!做EMSA,蛋白与DNA不结合?
天一湖医者
可能是实验过程中破坏了蛋白和核酸之间的互相作用。
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问
木瓜蛋白酶-sevag法怎么除多糖蛋白啊
Eason老歌迷
可以试一下阳离子交换柱色谱除蛋白。
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问
原核诱导蛋白,相关问题求助?
Eason老歌迷
诱导的蛋白只在沉淀中,上清中没有,这个现象很正常,我也遇到过。你可以提前去biotech上查看预测蛋白可溶性问题。在或者看你的外源蛋白是否含有稀有密码子,如果有的话建议使用Rosetta表达菌株。
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问
高尔基染色
Eason老歌迷
高尔基染色的话,动物不能灌注,因为灌注会造成阴性结果。我们都是直接处死动物以后取脑组织,水洗一下,放入1、2混合液,24小时后换液,注意避光,室温放置14天。我觉得你说的这个沉淀其实对实验结果并没有太大影响。
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问
求助 冰冻切片老是碎怎么办?
Eason老歌迷
切片如果老是碎,切之前用手捂一下冰冻切片表面,可能是组织冻得时间太长,导致太硬。
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问
肺炎克雷伯氏菌感受态细胞总是电转不成功,请问OD值是需要摇至0.5还是要更高,因为0.2
府宅
制备感受态细胞主要是控制细胞在对数生长期就可以了,一般来说OD值在0.4到0.5,长到OD值0.4~0.5的细胞摄取DNA的能力比较强,不需要更高。
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问
谁能够帮我解答一下肺炎链球菌D39、R6、ATCC49619的区别吗?
dxy_gwrp7ndq
D39”“R6”这些都是这些菌株的发现者给它们的命名。ATCC的菌株是模式菌株,在菌株保藏机构稳定保藏,保藏时间长,也需要传代,防止其变异,一个碱基的变化就变成了另一个菌株。NCBI上有Streptococcus pneumoniaeD39,Streptococcus pneumoniaeR6的全基因序列,可以拿来设计引物用ATCC49619当作模板进行克隆
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