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蛋白跑胶
bamboopiggy
可能是你蛋白的浓度太高了,或者是蛋白出现降解了。
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问
Touch Down PCR?
bamboopiggy
touch down pcr本来就是为了更好的得到实验结果才加的pcr程序,不需要优化,一般你把 touch down的annealing temperature 设置从55-65之间,就可以。如果说你的primer的Tm值太高,也可以适当的把annealing temperature的范围提高一些
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问
谷氨酸棒状杆菌基因整合
Eason老歌迷
不用!不用加终止子,你加完之后他有的基因没表达会有影响的。
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问
H9C2细胞用cck8做细胞生长曲线出现的问题
Eason老歌迷
感觉是你的个人操作问题。另外提个建议,做生长曲线为什么用CCK-8?直接对细胞计数多直接可靠?我建议你用细胞计数法,最具有说服力,谁也不会有疑问。平行养多皿细胞,每间隔一段时间收细胞计数,每个时间点3次重复。做个折线图,很方便的。
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问
Cck8与六孔板结果相反
Eason老歌迷
不知道你有没有看过一篇文献,药物积聚程度与细胞死亡相关。还有一种可能,我觉得是不是你在6孔板中加药的浓度没有计算好。
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问
取材完来不及做流式的组织如何保存呢?-80可以吗?
bamboopiggy
绝对不能-80,一旦-80.你就没法再用了。流式一般用新鲜的细胞,实在做不完,你放4度保存都比-80好
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问
乳酸脱氢酶释放实验遇到的问题
Eason老歌迷
我之前也遇到过这种情况。需要注意一下各组细胞接种密度是否均一,生长状态是否一致。一般细胞种板时应不断摇晃细胞悬液使之密度均一,另外注意每组细胞各孔OD值是否相差很大,如果标准差太大,则样本不能很好的代表总体。如果这些都没问题,就应该注意一下药物的配制问题,药物配制的时间(时间过久可能失效)、纯度(纯度不高会影响药效)
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问
做定量pcr 的时候,跑出的数据要怎么计算相对值
bamboopiggy
用ΔΔct法,你直接套进去,然后放到excel里面处理就可以。
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问
qPCR重复性和结果处理
bamboopiggy
1、实验性重复,是指每次实验,每个样品,针对每个基因要有最少三个复孔。不用12个,也不用重复三天。2、①这个都可以,看你想怎么处理。②3个复孔取平均值。3、你的实验结果可以,但是太费了,你只要做3个复孔,做一天就可以。
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请问,这是HCT15细胞,这个给个的团块不会移动,是什么污染吗?好奇怪呀
Eason老歌迷
你的图没有上传上来。可能你这个细胞培养皿里的团块是传代没有传均匀,细胞成团了,并不是污染。
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问
小鼠骨髓间充质细胞培养
Eason老歌迷
看着还行,状态还行。刚提取出来的时候,用PBS洗涤贴壁细胞(第0代),每3-4天加入新鲜培养基;初始贴壁纺锤形细胞第3天显示为单个细胞; 在4-8天内,培养物变得更加清晰,并在2周内达到65-70%的影响;在这个阶段,培养物通常表现出两个特征:首先,平板可能含有不同大小不同的成纤维细胞集落; 第二种可以包含散布在细胞集落之间或之上的非常少量的造血细胞。
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问
RAW264.7细胞的M2极化方案
dxywode
变化没有LPS刺激大,前段时间有个做巨噬细胞的老师建议我不要用细胞株做M2型,用骨髓细胞做。
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TCID50结果在稀释梯度高的孔忽然出现异常阳性,是污染吗?
Eason老歌迷
可能是研磨裂解不充分,让病毒颗粒没有完全释放出来,聚集导致后面孔有阳性。
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乳鼠成纤维细胞培养问题讨论
Eason老歌迷
大部分都是用高糖DMEM,但我最近用低糖培养细胞时,也未发现有明显不同。他们之间就只有糖份的含量不同,其余是完全一样的。
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问
求细胞生长
Eason老歌迷
一般刚开始做的话你就可以做6纵列,每列5个副孔。96孔板的每个孔上,加入100微升的细胞悬浮液。把它从左边加到洞底。加入一半板材后,与未加入的细胞悬浮液混合,然后继续加入剩余的一半板材。盖上盖子后,用左手轻轻握住木板的左边,然后用右手轻拍木板的右边缘。注意力集中在力量上(通常敲击它三次)。太多或太多次会导致细胞堆积。顺时针转动盘子(逆时针方向不好) ,将剩下的三面逐一拍打,静置5分钟左右,然后放入
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角蛋白10,分子量50,出现这种情况不晓得什么原因,各位大佬们,救救我吧!
Eason老歌迷
一个是背影有点脏,建议你封闭时间长一点。二是你Western转膜液要用新鲜的,不然转膜效果不好。三是抗体孵育时间可以久一点,抗体浓度别太浓。
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低分化PC12
Eason老歌迷
看着不像是真菌感染,我觉得可能是细胞团,真菌丝形状不是这样的。
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求助:小鼠原代肝星状细胞提取!!!
Eason老歌迷
给你分享一下我的提取方法吧,说不定对你有所帮助。先原位灌注:1、1ml5%水合氯醛麻醉大鼠,腹壁酒精消毒,十字切口打开腹腔,用湿棉签将肠管推向左侧,暴露门静脉和下腔静脉。2将充满灌流液的针经小口插入门静脉,止血夹或线结扎,软管部分用纸胶布固定以免滑脱。3、灌注I液灌注在肝脏迅速发白后前断下腔静脉,肝脏在全部灌注完后可见白色纹理。可以注射器灌注,也可以使用专门的大鼠灌注器。先灌注液:5min37度\
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【求助】取材小鼠大脑杏仁核
bamboopiggy
你可以去视频网站找找看,我取的时候,是从大脑底部,先取丘脑,然后海马和杏仁核
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原代脂肪干细胞在显微镜下看有很多贴壁的,一换液就没有了。这是因为贴壁的是其他细胞还是贴壁不劳啊?
Eason老歌迷
可以从下面几个方面考虑,1,是不是你的双抗浓度太高了呀,2你的细胞是第几代了,若原代,换液时应轻柔一些,若代数较高,是不是细胞的增值速度慢了呀,3,应考虑一下你的细胞的接种密度。
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