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chip实验问题
Eason老歌迷
看了他的图,觉得是基因组DNA降解了或者根本没有提取出来。因为都没有看到DNA样品,亮带大小都在1200bp一下显然不是基因组DNA。
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问
FC载体构建
Eason老歌迷
是的,每次做抗原还要进行酶切去除,那也太麻烦了。换成羊驼的FC可以省去酶切这一步试一试,看看效果。
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问
求助|red同源重组,打靶片段连接不上
Eason老歌迷
可能有几个原因,red同源重组失败一般是因为DNA链断裂,还有可能是是同源臂太短(<13 bp)没有连接活性,连接不稳定,会断开。或者是同源臂不在载体末端,重组酶切不到可以连接的序列位置,连不了
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问
求助大佬,小鼠的流氏细胞术检测
Eason老歌迷
不可以用脾脏代替血液来做流氏!还有就是小鼠做淋巴细胞分群必须经过刺激培养,最好是按照操作说明书来,不用图省事。
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问
求助:小鼠皮肤表皮真皮分离
Eason老歌迷
可以浸泡过夜后,用手术刀刮除表皮。刮下的表皮可用于分离表皮细胞,每只小鼠可得到约3x10个表皮细胞。然后将真皮剪碎,0.25%的胶原酶37℃消化至少1h,在处理真皮细胞。
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问
MA104细胞感染病毒
Eason老歌迷
具体可以参看这个文献,”轮状病毒感染诱导MA104细胞感染相关蛋白的分析鉴定”。感觉是你细胞生长状态不好,都老化死亡了。
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问
大鼠怀孕
Eason老歌迷
一般我们都是用棉签蘸取法,然后涂片,染色,观察。
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问
如何获得抗体的可变区序列?
Eason老歌迷
具体可以参看这篇文献,”一种结合SOLID测序和单细胞RT-PCR的人抗体可变区获取方法”。还有这篇也详细讲解了过程”抗RET突变体蛋白单克隆抗体可变区序列的制备方法与流程”。
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问
关于CD11b和Iba1标记活化的小胶质细胞
Eason老歌迷
cd11b和iba1组合标记可用于区分小胶质细胞与巨噬细胞。静息小胶质细胞表面标记物为 CD11b。
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问
内质网荧光染色证明内质网应激
Eason老歌迷
具体可以参看这篇文献,讲的很清楚,”内质网特异染色法在内质网应激评价中的作用”
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问
求线粒体自噬特异性抑制剂
Eason老歌迷
我们一般用3MA比较多,推荐你用这个。现在有文献已证明ULK复合物和Beclin1的正调节剂的抑制剂可阻断线粒体自噬,包括MAP激酶,JNK1,ERK和p38的抑制剂。阻断线粒体自噬也有其他方式,如class III PI3激酶抑制剂可通过抑制自噬捕获阻断自噬进程,所以说这些也可以用。
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问
关于stat3的抑制剂sh-4-54的使用情况
Eason老歌迷
好的。SH-4-54是一种高效的STAT抑制剂,其作用STAT3和STAT5的KD分别为300 nM和464 nM。用于体外研究 的话,SH-4-54在人恶性胶质瘤脑肿瘤肝细胞(BTSCs)中表现出空前的细胞毒性,而在人类胚胎星形胶质细胞中没有毒性。此外,SH-4-54有效抑制STAT3磷酸化和其下游转录靶点。用于体内研究的话, BT73原位异种移植的小鼠体内,SH-4-54 (10 毫克/千克,
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问
问p-gp逆转耐药实验阳性对照药为什么都选维拉帕米?
Eason老歌迷
因为最开始发现的第一代p—gp抑制剂就是它啊,第一代P-gp 抑制剂是一批以钙离子通道抑制剂维拉帕米和免疫抑制剂环孢菌素A为代表的口服药物。还有普罗帕酮、奎尼丁、红霉素、氯丙嗪、咖啡因、利血平、育亨宾和他莫昔芬等等。基于人空肠切片做实验,发现奎尼丁、环孢菌素A 和维拉帕米增加了空肠中罗丹明123 的累积,即这3 种药物使罗丹明123 的AUC 增加了,并且罗丹明123 的累积量的增加呈浓度相关性。
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问
western blot,请问电泳的时候总是有这些尾巴是为什么
Eason老歌迷
细胞样本的话是残存血清的原因,其次是制胶的原因,另外上样过多或者上样时候吸取的不全是上清也会造成。
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问
请教各位大神这是什么菌污染
Eason老歌迷
可能是黑胶虫污染。在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动(类似布朗运动)。
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问
求助各位大佬,纯蛋白过离子交换柱前平衡柱子时为什么要用高低盐平衡?为什么要降盐啊?
Eason老歌迷
有利于纯化啊。不同的离子团跟柱胶的结合能力不同,盐梯度洗脱可以使结合能力不同的离子团逐步洗脱,常用于不同蛋白的分离纯化。
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问
新手小白做WB,目的条带不清楚,还有趋势不对怎么回事?求帮忙
Eason老歌迷
能看到模模糊糊好几个条带,背景比较脏,建议你可以封闭时间稍微延长,然后你的抗体特异性不高,可以换一个特异性高的试试。
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问
多次稀释,内参基因(ct17、18)与目的基因(ct32、33)ct值相差大于10
n0y0j7
扩增效率ok的话,都可以接受吧。相对定量,本来就是相对比较高低,
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问
叠氮化钠在一抗稀释液中的作用
balalaLy
防腐作用。可以不加的话尽量不要加。可能会对蛋白有一定的影响。
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问
ROS检测
whilt-shirt
有可能是高浓度导致细胞全死了导致的
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