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新手小白做WB,目的条带不清楚,还有趋势不对怎么回事?求帮忙
Eason老歌迷
能看到模模糊糊好几个条带,背景比较脏,建议你可以封闭时间稍微延长,然后你的抗体特异性不高,可以换一个特异性高的试试。
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问
多次稀释,内参基因(ct17、18)与目的基因(ct32、33)ct值相差大于10
n0y0j7
扩增效率ok的话,都可以接受吧。相对定量,本来就是相对比较高低,
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问
microRNA有没有转染量多促进靶基因表达,转染量低抑制靶基因表达的现象
bamboopiggy
你用luciferase实验验证一下它们之间的相互关系。microRNA mimics下调蛋白的表达,这个是定论。感觉你要么是mimics有问题,要么是你的目的蛋白的wb有问题。
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问
请问细胞杀伤肿瘤效果,除了用荧光素酶检测荧光强度,还需要用LDH和CCK8来检测杀伤效果吗?
bamboopiggy
有一个能说明问题就好。但是多种方法说明一个问题,更solid
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问
大鼠脑组织的冰冻切片
bamboopiggy
不固定,直接用蔗糖脱水,细胞的结构会损坏,不能这么做。
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问
请问提取植物总蛋白的方法有哪些?
你好几和户
提取方法主要有SDS-PAGE loading buffer煮沸法、苯酚提取法、TCA丙酮沉淀法等。
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问
流式上机操作,求教程。
你好几和户
流式细胞仪的使用操作规程...... ①打开电源,对系统进行预热;②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小;⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算
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问
培养的293T细胞总是会出现如图的棒状结构,越来越多。 细胞仍然可以生长 ,求教这种是什么污染该怎么解决 谢谢~
whilt-shirt
可以用PBS多洗几遍,或者增加双抗浓度试试
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问
WB怎么做才是杂志要求的原始条带?
麻黄连翘赤小豆
蛋白分子相近的一抗最好不要放一起混,后面说不清,距离远的可以。如果只能相近的就把内参跑完,洗掉一抗然后重新孵育那个一抗。主要还是看杂志要求,不能裁膜只是相对的,看你的抗体蛋白分子量
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问
用PEG6000纯化慢病毒没有沉淀
bamboopiggy
我用的是PEG8000,但是原理是一样的,你对光看一下管子的侧壁,尤其是15ml管,有的时候,沉淀会直接挂在侧壁
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问
中提质粒有非特异性条带
bamboopiggy
你buffer1 里面加RNase了么?去除rna试试
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问
叠氮化钠在一抗稀释液中的作用
balalaLy
防腐作用。可以不加的话尽量不要加。可能会对蛋白有一定的影响。
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问
氯化锂-匹罗卡品慢性癫痫模型 求助
bamboopiggy
应该做预实验,把小鼠拿到实验室,随时观察。实在不行可以申请动物房进行小鼠行为监测
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问
细胞加干预后形态立即发生变化是什么原因 求助🆘
balalaLy
可能是干预药物浓度高了,不同批次的药物作用效果可能会有差别
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问
跑蛋白封闭的时间只能两个小时吗?我做实验有时候忘记时间,封闭了3-4小时反而跑的更好看
富婆贴贴
封闭时间不是固定的,但是要超过45min
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问
请问如何鉴别糖蛋白上的糖的类型呀?
你好几和户
先做SDS-PAGE,然后进行质谱分析,得出质量指纹谱,然后区别类型。
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问
22克左右的裸鼠,皮下接肿瘤细胞,能长出瘤子吗?
balalaLy
4-6周接瘤,长10天左右再给药,就差不多了。太大了瘤子长不起来
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问
骨组织如何提基因?我在提骨结核的结核杆菌,如何提取骨细胞基因?
balalaLy
跟其它组织类似,用液氮研磨然后加trizol裂解
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问
小鼠皮肤损伤模型
bamboopiggy
可以用笔先画个一样大小的圈,然后用剪子或手术刀造模
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问
apap造模肝损伤
whilt-shirt
要看一下你用的什么品系的老鼠,C57一般都是在10-20左右
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