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        新手小白WB条带分析不懂,求大佬指点

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        白昼树dd1

        图片描述

        第一张是加抗鼠的一抗二抗 目的蛋白

        电泳是上胶80V 20分钟 下胶120V90分钟

        转膜是200mA 90分钟

        图片描述

        第二张是加抗兔的一抗二抗 内参

        希望大佬们指点一下,我重新跑胶的时候marker的条带会朝两边斜,是胶没制好,还是说加样的问题?

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        5 个回答

        user-title

        医路向前Dr夏

        有帮助

        第二条有黑点,可能是样本问题。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        Marker的问题应该是上样量没有配平,Marker两个孔补点2x loading buffer,

        内参条带很弱,说明总蛋白量很低,也是导致图一目的蛋白条带弱的原因。

        条带上有黑点,杂点,可能是封闭液没有溶解好,或者 洗膜buffer不干净

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        第一张图抗体有点问题,第二张图有可能是上样量太低了

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        有几个问题需要注意,一个是maker上样量可以少一点,一个是制胶需要搅匀,一个是电泳液不要使用太多次。

        user-title

        求求不要翻车啦

        有帮助

        第二张图有小黑点,问题出现在奶粉没溶好。条带不清晰,或没有,跑电泳,染胶,如果条带清晰,说明是转膜的问题,蛋白都没转过去,可能是你夹三明治的问题。如果条带不清晰,说明你的样品有问题。

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