登录
搜索
提问
我要登录
|免费注册
首页
>
实验问答
>
全部
实验问答
22,215,058 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?或者提出了很多杂蛋白
冷泉港蛋白
分子量太大了,表达不出来;也有可能同时有细胞毒性。1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签);如果不表达,诱导剂浓度,温度,时间的调整方面,意义不大,不会实现从无到有的质变,只是个量变而已。3.如何解决: A.大蛋白很少使用大标签, B.截断表达 C.更换为真核表达系统 D.做实验之前先预研一下:文献和商业化蛋白的厂
4 回答
523 围观
4 回答
523 围观
去回答
问
那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏,不至于冻存死亡呢?
麻黄连翘赤小豆
在冻存过程中减少冰晶的产生,这样细胞就不会刺破,根据这个目的进行冻存方法的改进。有些细胞是95血清5培养基,还有现成的冻存液都是可以用
4 回答
641 围观
4 回答
641 围观
去回答
问
免疫荧光实验中,怎么改善荧光易淬灭问题
麻黄连翘赤小豆
可加防荧光淬灭剂,或者你速度快点以及在激光照的时候再拍照,不拍的时候移开玻片
3 回答
841 围观
3 回答
841 围观
去回答
问
做WesternBlot时,提取蛋白后冻存,条带很弱
麻黄连翘赤小豆
说明你这个蛋白已经降解了,建议重新提蛋白
4 回答
251 围观
4 回答
251 围观
去回答
问
在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢
balalaLy
要么是胶片本身曝光了,要么是压胶片的时间长了,建议可以同时压4-5张胶片,时间1分钟以内
5 回答
540 围观
5 回答
540 围观
去回答
问
抗原检测出的分子量比资料上的大
whilt-shirt
有可能是抗原上有其他基团导致的
3 回答
318 围观
3 回答
318 围观
去回答
问
如何验证细胞上有无某蛋白的存在
whilt-shirt
可以用WB或者免疫荧光试试,有的抗体是共用的,具体要看抗体的说明书
3 回答
315 围观
3 回答
315 围观
去回答
问
免疫荧光加完一抗之后,需要室温孵育一会吗?还是直接4℃过夜就可以了?
whilt-shirt
直接4℃过夜就行,这样效果会好一点
5 回答
8151 围观
5 回答
8151 围观
去回答
问
IL-1β曝光出的目标条带与分子量不符,正常31kDa,实际在35上面。怎么回事?MDA-MB-231亲本细胞系。
whilt-shirt
这是正常现象,说明书上只是理论值,实际根据样本的不同会导致分子量增高或者降低
4 回答
265 围观
4 回答
265 围观
去回答
问
关于免疫沉淀实验的一个问题?
balalaLy
coip的原理就是用目标蛋白的抗体去拉然后分别用目标蛋白和结合蛋白的的抗体跑wb验证,或者是ip下来之后做质谱验证
3 回答
450 围观
3 回答
450 围观
去回答
问
MRC-5细胞复苏后状态极差,比例是5:4:1,是说明书推荐比例,有必要提高血清浓度吗?
whilt-shirt
有可能是没冻好,建议更换成品的冻存液
4 回答
317 围观
4 回答
317 围观
去回答
问
前后引物同时加入为什么会P出两条带
n0y0j7
碱基配对不是绝对正确,会有错配的,结合在不同地方,扩增出不同的条带
6 回答
208 围观
6 回答
208 围观
去回答
问
酶联免疫实验为什么要设置复孔?
whilt-shirt
设复孔是为了降低加样和系统误差
3 回答
667 围观
3 回答
667 围观
去回答
问
有的抗体在做IF时,效价很低,做wb时效价很高,说明书写明可以做IF和wb,种属也没问题,出现的原因?
whilt-shirt
这是抗体的原因,建议更换抗体试试
4 回答
468 围观
4 回答
468 围观
去回答
问
coip怎么区分抗体轻重链?
此用户已注销
在IP实验过程中,很容易产生IgG重链轻链的干扰,严重影响对结果的判断。那么,要想知道怎么样减少这些干扰呢,首先要理解这些干扰是怎么产生的。最好选择两个不同种源的抗体。选择同一种源的抗体的问题在于:在WB之前进行的蛋白变性这一步,由于加样缓冲液中含有巯基乙醇,巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏,从而使的抗体变成重链分子55KD和轻链分子25KD。假设你IP的抗体是兔抗的,目的蛋白进行WB
3 回答
6627 围观
3 回答
6627 围观
去回答
问
小鼠脾分离出来的细胞一次可以孵育四种抗体吗?
balalaLy
可以,比如两个鼠抗两个兔抗,但两个同种属的一抗亚型不一样比如一个是IgGa,一个是IgG2a,然后对应的二抗也是不同亚型。
3 回答
223 围观
3 回答
223 围观
去回答
问
细胞免疫荧光的假阳性
此用户已注销
在免疫检测中,比如 ELISA,CLIA 或者侧向流免疫检测中,嗜异抗体 (HA),人抗鼠抗体 (HAMA) 和类风湿因子 (RH) 会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性,导致错误结果和诊断。 因此,非常有必要使用专门的免疫阻断剂来降低这些干扰引起的假阳性结果,从而提高检测结果的准确性
3 回答
465 围观
3 回答
465 围观
去回答
问
为什么我的视网膜组织外核层全部是假阳性?
此用户已注销
视野检查假阳性率高是因为测试表上的阳性结果通常表示某些测试指标超出正常范围。此外一些阳性结果表明,身体疾病或生理变化会导致某些结果。相反,如果测试单或报告单呈阴性,大多数基本上否认或排除了某些病变的可能性。然而,由于环境因素、操作因素、实验方法或患者自身因素,没有阳性症状的人可能被检测为阳性结果,这被称为假阳性。
3 回答
251 围观
3 回答
251 围观
去回答
问
咨询一下大家有关小鼠NK细胞的问题
Eason老歌迷
鼠源的就行。具体用量你可以参看这篇文献”IL-2及IL-15对小鼠原代NK细胞扩增数量及功能影响的研究”,讲的很详细。
3 回答
459 围观
3 回答
459 围观
去回答
问
求助 为什么我1000bp的条带pcr产物跑胶跑到了250的位置,之前跑都是正常的
n0y0j7
和之前肯定有不一样的地方,pcr试剂,引物,模板其中总有弄错的
4 回答
648 围观
4 回答
648 围观
去回答
1
•••
607
608
609
610
611
•••
1003
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序