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        求助WB内参不齐

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_y12hy3jr

        重复了三次,也根据内参调整过上样量还是不齐。BCA法测的蛋白浓度,曲线很好,就是从右往左数第一个和第三个浓度比较低,上样量10多ul,其他组只有3ul左右。这是第二次重新提蛋白跑的,之前两次也是不齐

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        3 个回答

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        可以用image j计算灰度值后调整上样量,缺的部分用2x的loding buffer补足

        user-title

        dxy_y12hy3jruser-title

        好的,谢谢!

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        从你的wb图上看,最后一个和倒数第三个条带弱,还是验证了你的bca蛋白结果。你可以调整上样量,如果还是调不齐,建议做灰度扫描,将目的蛋白的灰度值比上对应的内参,这样比较准确,目前很多文章的western图都会附上相应的灰度扫描结果,这样更加定量和直观。还有可能是你的胶的问题,可能没凝好。

        user-title

        dxy_y12hy3jruser-title

        嗯嗯,谢谢你的建议!感谢!

        user-title

        申东熙老伯

        有帮助

        第二次重新提的蛋白也测一下浓度,根据做的条带适当增加或者减少上样量,你这个条带距离调齐还是很远。

        user-title

        dxy_y12hy3jruser-title

        谢谢,我已经重新提了蛋白,增加细胞量,重新做。

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