实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问琼脂糖凝胶电泳

illusio

可能是制胶时带入了杂质，形成了障碍物，使得条带电泳时受到阻碍无法继续电泳，从而形成扭曲。或是制胶时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留，形成一些浓度较高的区域，在DNA电泳经过这些区域时，部分DNA被阻碍在这里

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问western膜的保存 strip心得显多个蛋白

balalaLy

我自己的习惯是保存在tbst里边，一个星期内是可以的，我课题组有个博后是把条带放吸水纸上弄干然后用保鲜膜封起来，说是以后需要补实验的话可以再拿来用，她博士阶段经常这样做，是可行的

3 回答4991 围观

问（求助）WB条带分析

麻黄连翘赤小豆

封闭没封好，都是奶粉颗粒一抗特异性不好，建议选择单克隆抗体

3 回答345 围观

问请问我这个是什么情况，敷上一抗以后膜上目的条带的位置可以看见灰色条带，但是扫膜看不到目的条带（内参没问题）

whilt-shirt

有可能是二抗的问题，建议重试。

4 回答267 围观

问这是我跑的ERK和p-ERK，是要加大蛋白上样量吗，还是减少？

balalaLy

蛋白量没有问题，增加点可能更好。条带有点弥散，可以用好一点的loading

3 回答461 围观

问如何检测耗材上的DNA酶和RNA酶

illusio

一般用PCR检测，电泳基本检测不出来

3 回答1044 围观

问qPCR怎么会有这种扩增曲线？

秋秋欣欣

机器没问题的话，应该是环境有污染了，或者你的试剂有污染

5 回答503 围观

问提取RNA扩增后质控起不来内标也起不来

Topmicro

检查一下用的引物是不是有问题。

4 回答388 围观

问关于免疫细胞培养的问题

麻黄连翘赤小豆

这是贴壁细胞，可以胰酶消化，但要注意消化时间，细胞株的话消化1-2分钟，原代的话就要消化久一点

3 回答275 围观

问免疫组化一抗稀释液

bocardio5927

同一试验尽量选择同一种，减少实验误差，毕竟如果实验结果不稳定，找原因也是很麻烦

4 回答391 围观

问有人遇到杂志需要提供使用动物的知情同意声明吗？

Topmicro

写明来源还有提供伦理证明应该就可以了。

4 回答335 围观

问关于IL-2冻干粉的处理

麻黄连翘赤小豆

可以直接加入培养基，但之后需要进行超声如果溶解不了的话。加BSA保存还是要看说明书，每个商家可能保存条件不一致

3 回答603 围观

问BALF

Eason老歌迷

灌洗0.5ml，三次。用12号灌胃针。

1 回答422 围观

问二氢辜酮混匀

Eason老歌迷

如果说混玉米油比较难，可以将二氢睾酮放入乙醇中溶解。

1 回答699 围观

问请问泛死亡用αtubulin作内参可以吗

Eason老歌迷

可以的，我们实验室总在用tubulin当内参。

2 回答560 围观

问免疫组化，细胞核膜糊，对比不鲜明，有什么解决办法

Eason老歌迷

要是细胞核模糊，对比不明显。建议是组织离体后尽快固定，组织块大小为15×15×5mm，切开固定效果好。固定液以10％中性福尔马林缓冲液为佳。固定时间在4h-24h之间，长时间固定会影响抗原决定簇的暴露，产生阴性结果。固定液的量要超过组织体积5倍以

2 回答502 围观

问请问肾脏组织做流式细胞术样本怎么处理呀？怎样制成单细胞悬液？

Eason老歌迷

选取合适的肾脏组织。选好的酶溶液1～2ml加入盛有被消化组织的试管中。常规消化20～30min（恒温37℃或室温），消化期间间断振荡或吹打。终止消化，收集细胞悬液，以300目尼龙网过滤，除去细胞，低速离心除去细胞碎片。加入PBS2ml充分混匀，离心弃掉上清。再加入0.5mlPBS重悬细胞。将制备好的单细胞悬液进行荧光标记后上机检测或保存备用。

2 回答3217 围观

问免疫组化，中间和边缘染色深浅不一，什么原因呢！

Eason老歌迷

有可能是你蜡圈画的太小，显色液覆盖的面积不过大而产生了边缘效应。最外侧的组织片最好离显色液外缘0.5 cm。

3 回答846 围观

问免疫组化，抗原阳性检测率及着色很弱，什么原因呢？

Eason老歌迷

你可以先确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。检查标本的储存条件，最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。

2 回答331 围观

问免疫组化，组织出现异染，什么原因呢？

Eason老歌迷

有可能是抗体的问题，比如说用了非特异性抗体，也可能是苏木素染的不好。

2 回答336 围观

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