实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问人角膜内皮细胞系B4G12和21T有什么区别么？这两种细胞系建模内皮间质转化模型或衰老模型会有区别么？

龙大人驾到

人角膜内皮细胞系B4G12和21T是两种不同的细胞系，它们在细胞形态、生长特性、分子表达等方面存在一定的差异。具体来说，B4G12细胞系是一种来源于人角膜内皮的细胞系，主要用于研究角膜内皮细胞在生长、分化、代谢等方面的生物学特性。而21T细胞系则是一种来源于人角膜内皮的转化细胞系，具有更强的增殖能力和更弱的细胞一致性。当建模内皮间质转化模型或者衰老模型时，这两种细胞系的差异可能会对模型产生影响。例

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问如果筛选出的差异代谢物很少，该怎么办？

龙大人驾到

当利用常用的阈值筛选差异代谢物时，如果筛选到的差异代谢物很少，可能有以下几个原因：1. 样本数量不足或质量差：样本数量不足或样本质量差可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。2. 表达水平差异较小：如果筛选的阈值较高，可能会导致表达水平差异较小的代谢物无法被筛选出来。3. 生物学变异：生物学变异可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。为了解决这些问题，可以考虑以下几个方法：1. 增加样本数

5 回答1841 围观

问chip实验后面进行qPCR引物设计

huarenqiang5

chip实验后qpcr引物设计和普通qpcr引物设计一样，都需要引物的特异性高，并且要保证扩增效率高，才能确保模板以指数级别扩增。

4 回答1373 围观

问用PBS重悬细胞300g离心10min，重复两次，第一次离心细胞沉淀还多，第二次离心没有看到细胞沉淀请问这是怎么回事

huarenqiang5

考虑可能是没有离下来或是你弃上清的时候将细胞团块不小心吸走了。

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问先加入LPS诱导降低细胞活力百分之50后，如果再加入一种提高细胞活力的药物，比如银杏单体，细胞活力还可以提高吗？

土井挞克树

可以的，但是需要高浓度的银杏单体

4 回答557 围观

问通路抑制剂阻断通路后（比如Nrf2),还可以被药物(比如银杏单体）再次激活吗？细胞实验加药顺序应该如何？

土井挞克树

可以被再次激活，但是需要更高浓度的激活物

4 回答687 围观

问c57小鼠，8周龄，结肠炎模型，需要定制高色氨酸饲料，饲料中添加色氨酸的量一般为多少啊？在原基础上添

huarenqiang5

饲料中在原基础上添加色氨酸为0.05%左右。

4 回答447 围观

问蛋白质分子量很小，怎么做wb？要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化和western blot 试验吗?做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗?

周末也要努力呀

可以使用WB或者PCR验证一下，也可以搜索相关文献基础，小分子的WB需要减少转膜时间。

5 回答740 围观

问用高效液相测红景天苷、绿原酸、迷迭香酸的含量，这些标准品用什么溶剂溶解好？多少浓度的溶剂溶解呢？

huarenqiang5

测迷迭香酸的含量一般用甲醇:0.1%三氟乙酸(40:60),流速1.0mL·min-1,检测波长330nm,柱温35℃。

3 回答421 围观

问PMA诱导THP-1相关问题

huarenqiang5

PMA一般都是用无血清培养基。

3 回答699 围观

问请问速眠新Ⅱ麻醉剂一般开封后能储存多长时间？

huarenqiang5

一般情况下开封后可以保存4周左右。

4 回答956 围观

问关于WB蛋白质提取，如果是悬浮细胞或者说细胞死亡过多怎么提取（可以的话发下实验方案）？谢谢！

周末也要努力呀

悬浮细胞离心后直接加裂解液就行了，最好超声一下增加浓度

4 回答708 围观

问趋化因子CCL20和CTSD/CTSB怎么共同孵育，怎么继续做Western实验

龙大人驾到

想要在硬骨鱼中重复一篇文献中的实验，这篇文献中的实验主要是研究组织蛋白酶B和D对趋化因子CCL20的切割作用。下面是一些可能有用的步骤：共同孵育：共同孵育是将两种蛋白质一起孵育的实验步骤，目的是研究它们之间的相互作用。在共同孵育前，需要确定孵育的最佳条件，如温度、时间和缓冲液等。对于硬骨鱼中的组织蛋白酶和CCL20，可以先尝试在不同的缓冲液中进行共同孵育，例如PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液等

3 回答463 围观

问请问平板细胞克隆实验，一个孔铺多少细胞，如何给药

小小翻车鱼

在细胞克隆实验中，药物对结肠癌细胞的抑制作用通常会通过评估细胞生长、存活和凋亡等方面来衡量。以下是一些建议：1. 铺细胞的数量：根据细胞类型和生长速度，铺细胞的数量可能会有所不同。一般来说，在6孔板中铺2000-5000个细胞是一个比较合适的范围。可以先铺一个中等数量的细胞（如3000个），然后观察细胞的生长情况，根据需要调整细胞的数量。2. 给药时间：给药的时间取决于实验设计和目的。如果你希望了

9 回答6931 围观

问有人造NEC模型吗？可否交流一下。

高山云初

NEC的发病机制并不清楚，最令人困扰的是到目前为止NEC没有特异性的治疗方法，是一个难题。

4 回答509 围观

问如何将GST标签添加至蛋白的C末端？

huarenqiang5

一般利用重组DNA技术插入到目的蛋白的C末端。

5 回答1683 围观

问NCBI引物特异性检测出现以下问题是什么原因？

loveliufudan

主要有以下几点可能原因:1. 引物设计的目标基因在NCBI的小黑麦数据库中没有存档记录。NCBI数据库中小黑麦的序列信息还不是非常完整。2. 引物的特异性不高,除了目标基因,也能识别其他非特异性序列。可以调整引物设计,增强其特异性。3. 目标基因在小黑麦中的表达丰度较低,NCBI中没有收录到这一基因的序列信息。可以考虑在更广泛的数据库或转录组数据库中检索。4. 引物设计的参数需要优化,如Tm值、G

3 回答2466 围观

问请教用加尾法进行microrna的反转录和qpcr

从头酷到矫

你好.可以分享一下u6的引物序列嘛

2 回答489 围观

问求助 |给细胞转染了miR mimic，目标蛋白反而升高了。

yqyq28

你好！请问解决了吗，我也遇到了这种情况！！

3 回答402 围观

问miRNA加尾法进校qPCR的通用引物序列，请问哪位大佬能提供一下

秋秋欣欣

我用的U6引物序列是① U6snRNA F Primer 5‘ATTGGAACGATACAGAGAAGATT② U6snRNA R Primer 5’ GGAACGCTTCACGAATTTG

3 回答1262 围观

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