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问
疑似细胞污染,但是细胞库存很少,如何拯救
汤姆卜丽波
把细胞多洗几遍然后转到6孔板里,让它长,然后再挑污染少的或者无污染的消化传代,直到没污染为止,其实很难拯救
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问
提RNA之后,跑胶如图,想问一下是什么原因呢?(maker是一万的)
Dr_劉医生
从图片看用的是Trizol沉淀法跑的电泳图,电泳条带都没分开,marker浓度太高了,一般超过5000ng/UL就很难跑开;可以适当减少上样的量或稀释浓度
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问
GSVA富集的疑问
汤姆卜丽波
患者就是会这样,个体差异比较大
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问
样本量计算
Dr_劉医生
做的是横断面还是病例对照研究,讲公式的话估计一下讲不清,可以直接用PASS软件计算;首先样本量的计算是非常基本的,买本统计学教材看下就能明白;简单举例说一下横断面研究根据灵敏度和特异性计算样本量的方法(见文末图)此外,说几个影响样本量计算的重要参数如下:①研究设计类型(如横断面研究或随机对照研究)②结局指标类型(二分类变量或连续变量)③结局指标的预计值(敏感度或特异性或平均值或AUC)④容许误差⑤
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问
western操作问题
申东熙老伯
洗膜的时候可以放在一个盒子里,孵二抗的时候取决于你的两个蛋白抗体是什么抗什么。
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问
同一种细胞外泌体miRNA芯片测序结果一样吗?
cq2019
首先你要清楚这个外泌体在除对B细胞以外的细胞是否发挥功能作用以及作用的大小?相信类似的报道应该有据可循,要不然盲目做没有创新可言
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问
请问免疫组化显示的时间是多长时间?
bamboopiggy
你做预实验直接摸一下条件,每个人的反应都不一样。一般一抗过夜,二抗室温1-2个小时。
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问
细胞铺板老是长不好怎么办?
申东熙老伯
像24孔板这种的话,需要计数,计数比较精准,也会避免后续步骤的误差。
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问
请问怎样保存小狗(宠物)的基因以便克隆?
bamboopiggy
可以提取小狗的genomic DNA,然后-80度长期保存。最好找专业的机构,自己保存,容易出问题。
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问
WB实验投稿样本的重复性问题?
bamboopiggy
细胞是三次收样,跑三次胶得到三个结果。动物实验是每组至少五个,跑一次就可以。
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问
55-72kd的杂带,还有34kd那里的杂带。真是哭了最近每次做都是这个杂带。原本只有72那条,昨天出现了34那条,今天两条一起
申东熙老伯
抗体浓度是多少?有杂带说明抗体特异性不好,降低浓度试试。
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问
tgf-β 在培养液里的半衰期
whilt-shirt
如果是诱导48h以内,可以不换液,这样就不需要考虑半衰期
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问
求助小鼠T细胞p-STAT3及STAT3流式
Dr_劉医生
可以参考一下这份材料“流式细胞术检测外周血白细胞内的磷酸化STAT3”,数据库都能下载
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问
蛋白棕榈酰化
Dr_劉医生
之前听过拜谱的工程相关的讲座,棕榈酰化修饰蛋白组现在也是比较前沿的技术,相信文献你也找到过,我也附上几篇综述;主要因为技术路线都涉及质谱等仪器,导致很多实验操作都很难,可以去咨询相关生物科技公司,外包或者请教他们一下;参考文献:[1] Main A, Fuller W. Protein S‐Palmitoylation: Advances and Challenges in Studying a
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问
PBMC细胞污染求助
灵枢天问
大量杆状小点,会运动,培养液略微泛黄这些都是杆菌污染的特征
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问
小鼠检测肝肾功能这些生化指标的话一次大概需要采多少血啊
bamboopiggy
这个要看你怎么测,一般送医院检验科的要200ul的血清,大概500-600ul的全血就可以。
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问
巨噬细胞流式
Dr_劉医生
首先你最好把流式的图片附上一下,圈门的主要是针对那分析哪一群细胞而设的,比如你的就是CD86和206,一般没特殊要求主要都是圈那一群比较集中,数量也较多的那一群,找出这一群不难的
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问
老师们,请问,人外周B淋巴细胞和人B淋巴母细胞有什么区别吗?
cq2019
区别肯定是有的,外周B淋巴细胞肯定是淋巴结中B细胞经运输到外周血分化才形成的;而人B淋巴母细胞是源于并存在于淋巴结中的,其分化强度不高
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问
细胞细菌共培养
汤姆卜丽波
按照你自己细胞的状态来调整细菌浓度,做个预实验找最适浓度
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问
有做植物细胞悬浮的大佬吗?想请教些问题。
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可在培养的不同阶段,吸取一滴细胞县液,放在载玻片上,滴一滴0。1%的酚藏花红溶液(用培养基配制)染色,在显微镜下观察。几活细胞均不着色,而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色,凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光,有经验的操作者,则可根据细胞形态,胞质环流判别细胞的死活。
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