实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求助！糖尿病模型组血糖连续三周降低，该怎么补救？？？

土井挞克树

停药，观察血糖变化，持续低需要重新造模

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问先诱导细胞死亡后，再加入保护细胞的药物可以逆转细胞死亡吗？（当CCK8降低50%，LDH释放增加）

土井挞克树

不可以，已经启动细胞程序性死亡了

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问求问怎么用软件预测蛋白的靶标位点，用什么软件比较好，求问，有偿求助

Dr_劉医生

都是用机器学习的方法，比较常用的是CSS-Palm，入门相对简单，首先搜索“CSS-Palm”或者复制网站地址进入（http://csspalm.biocuckoo.org/）。 STEP1：点击“ONLINE”，左侧显示的是我们可以预测的修饰类型。比如我们以乙酰化为例，点击进入乙酰化位点预测界面。 STEP2：点击界面上方“PREDICTION”，这里需要用到的蛋白序列的FASTA格式，选中所

3 回答1585 围观

问如何利用质谱技术研究蛋白质组学

土井挞克树

质谱鉴定互作蛋白主要是对互作蛋白质进行确认，在此之前需要通过蛋白互作实验进行互作蛋白的筛选和分离。常见质谱鉴定互作蛋白的样品多来自于IP，Co-IP蛋白互作样品，pull-down蛋白样品、串联亲和纯化技术或蛋白质微阵列得到的蛋白样品等。这些蛋白互作分析技术均有各自的优缺点，Co-IP的优点为可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合物，缺点是灵敏度较低不能进行亲和力低和瞬间的蛋白质相互作用分析检测

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问质谱和蛋白质组学的数据分析应用

huarenqiang5

可以利用双杂交技术和质谱法来研究蛋白质相互作用网络的构建。

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问中药配方颗粒溶解过滤过可以直接开展细胞水平的研究吗？

龙大人驾到

中药配方颗粒溶解过滤后的液体可以用于细胞水平的研究，但需要注意以下几个方面：1. 细胞毒性评估：中药配方颗粒中可能存在活性成分或化合物，对细胞有潜在的毒性。在进行细胞水平的研究之前，需要对中药配方颗粒溶液进行细胞毒性评估，确保其对目标细胞不会产生明显的毒性影响。2. 有效成分的验证：中药配方颗粒溶液中可能含有多种化合物，其中是否存在对目标细胞具有生物活性的有效成分需要进行验证。可以通过分离、纯化和

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问请问外泌体提取需要无菌环境吗

sswei

外泌体提取过程是需要无菌环境的。

3 回答756 围观

问请问各位大神，原代皮层神经元细胞铺板后在显微镜下观察是聚团的，是哪步出现问题呢？一直做不好原代细胞

牛牛哈

这主要是因为细胞没有重悬均匀，多混下就好

4 回答380 围观

问小鼠脾指数的具体算法？

龙大人驾到

小鼠脾指数（spleen/bodyweightratio）是一种常用的指标，用于评估小鼠脾脏相对于体重的大小。它可以反映小鼠脾脏的增大或缩小情况，常用于研究免疫系统、炎症反应等方面。小鼠脾指数的计算方法如下：1.首先，测量小鼠的脾脏重量（单位：克）。将小鼠取出并安全地处置，将其脾脏取出并用天平称重，记录脾脏的重量。2.接下来，测量小鼠的体重（单位：克）。将小鼠称重，记录其体重。3.最后，计算脾指数

7 回答18107 围观

问用邻甲酚酞络合酮比色法测肽钙螯合物的钙含量时，是否需要将肽钙螯合物的钙脱除下来转变为离子钙再进行测定？如何脱除？

huarenqiang5

操作步骤：1、制备样品：①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于 Ca的检测。②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 Ca的检测。③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的 Ca，可以使用 ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。2、配制 Ca显色工作液：临用前，取 Ca Assay Buffer和 OCPC显

4 回答433 围观

问我是用LPS诱导树突细胞成熟，结果细胞死亡，查了有不同的说明的，是不是一定要suitable for cell culture?

huarenqiang5

是的，一般都需要suitable for cell culture。

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问qPCR实验内参的值都比目的基因的值大，这正常吗。

龙大人驾到

在 qPCR 实验中，内参基因（也称为参考基因或稳定表达基因）应该具有相对稳定的表达水平，不受实验条件或处理的影响。它们通常用作标准化因子，用于对目的基因的表达进行相对定量。一般情况下，内参基因的表达值应该与目的基因的表达值接近。如果在 qPCR 实验中发现内参基因的值普遍比目的基因的值大，这可能是由于以下原因之一：1. 选择不合适的内参基因：内参基因的选择是关键步骤，应该选择具有稳定表达水平的基

5 回答13679 围观

问组织蛋白酶和趋化因子共同孵育看结果，可以做免疫共沉淀来验证吗？

sswei

免疫共沉淀能看出组织蛋白酶对趋化因子的切割后产生更小分子条带的反应

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问RNA琼脂糖无条带求解决方法

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因和建议:1.样品制备不当样品制备是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素之一。如果样品制备不当，可能会导致琼脂糖凝胶电泳没有条带。例如，DNA样品的纯度不够高、浓度过低或过高、RNA样品的完整性不好等。解决方法:在样品制备前，应该仔细阅读相关文献，了解样品制备的方法和注意事项。同时,应该对样品进行质量检测,确保样品的纯度、浓度和完整性符合要求。2.电泳缓冲液配制不当

5 回答6030 围观

问转染miR mimic，靶基因的mRNA反而升高了，靶基因的蛋白时有时无的降低是什么情况

龙大人驾到

当转染miRNA mimic（miR mimic）后，靶基因的mRNA反而升高，而靶基因的蛋白时有时无的降低，可能存在以下几种情况：1. miRNA的靶向调控机制复杂：miRNA可以通过与靶基因的3'非翻译区（3' UTR）结合，导致mRNA的降解或抑制翻译，从而调控基因表达。然而，miRNA的调控机制非常复杂，可能受到其他转录因子、蛋白质相互作用和细胞环境等多种因素的影响。因此，miRNA转染后

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问siRNA转染细胞，24小时可以提RNA吗？

龙大人驾到

在进行siRNA转染后的24小时内，通常无法直接从细胞中提取足够的RNA用于下游分析。这是因为siRNA转染后，siRNA需要一定时间才能进入细胞并发挥作用，以降低目标基因的表达水平。此过程需要一定的时间，并且目标基因的降低可能需要更长的时间才能观察到。通常，在进行siRNA转染后，需要等待一定的时间（通常是24至72小时）以使siRNA充分发挥作用并降低目标基因的表达。这样，细胞中的RNA水平才

5 回答3447 围观

问请问为啥我的免疫组化染出来片子是紫色的呀，其他人都是浅蓝色的

skyye

染色最后一步，苏木素染色后需在自来水流动水下冲洗（注意不要直接冲在拨片上）反蓝15min左右，胞核便会呈浅蓝色的。

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问考马斯亮蓝（兰）R-350是什么呀，怎么和R250、G250区别呀？实验时怎么选择，原理是什么

huarenqiang5

考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式，是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250（红色）缺少以G-250（绿色）形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。考马斯蓝染色原理：不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。当pH值小于0时，考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子，颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时，染料的总电荷为+1（2-磺酸

6 回答1099 围观

问石蜡切片细胞不成形，部分组织脱落。求大神指点！应该怎么解决呢？

龙大人驾到

当在制备石蜡切片过程中遇到细胞不成形和组织部分脱落的问题时，以下是一些可能的解决方案：1. 固定和处理组织时注意优化：确保你在固定组织时使用适当的固定剂和处理方法。不同类型的组织和细胞可能需要不同的固定和处理条件。确保使用适当的浓度和固定时间，并遵循标准的组织处理步骤。2. 组织处理中的脱水和浸渍：在脱水和浸渍步骤中，确保逐渐将组织转移到石蜡中，以确保组织的完整性。逐渐增加浓度的醇溶液（例如，70

5 回答809 围观

问有没有病理技术这一块的交流群呀，比如HE染色的问题，脱水不佳问题，切片问题，免疫组化，分子病理等，想要学习

skyye

丁香实验板块有很多包括病理技术染色等类似的实验交流，可以搜索试试，或者找病理科老师或实验室做过该类实验的师兄师姐请教的

4 回答400 围观

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