实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问光合测定仪3015D的人使用方法详细步骤

高山云初

1.将主机和手柄用数据线连接起来。打开电源开关,预热5-15分钟,如果环境温度低于25℃,需适当延长预热时间至15分钟左右。2.根据不同植物、不同光合速率在“默认设置参数”内设定不同的测量间隔。3.设置完成后进入测试数据界面,按“气泵”键打开气泵,使手柄叶室内的空气与主机之间进行交换。按下压柄,夹住需要进行测量的叶片。4.夹住叶片后,观察二氧化碳和湿度变化,当二氧化碳变化开始匀速下降、湿度增加时

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问请问一下有人用cd19和cd27分选记忆B细胞的吗？

羽2BRD

你看一下抗体是不是选择种属错了，或者是因为样品的表达水平不够，需要添加诱导剂或者更换更敏感的进口的抗体

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问溶血的标本如何做血型鉴定

feixue7758527w

溶血标本好像很难做血型标本的，你可以按照正常程序试试，实在不行就只能再次取血了

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问怎么判断基因间的调控是直接还是间接的？需要用什么实验证明？

土井挞克树

可以做对照试验，间接调控设计到多通路的用pulldown看是否存在多通路

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问做细胞实验，粉末状vc配制成液体了（已过滤），细胞培养基也过滤了，两者加在一起需要再过滤一次吗？

土井挞克树

一般是不用了，如果有污染就需要再次过滤

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问想问大家 Mst1fl / flCd4Cre小鼠和Mst1-/-小鼠有什么区别

小小翻车鱼

1. Mst1fl/flCd4-Cre小鼠：Mst1fl/flCd4-Cre小鼠是一种条件性敲除小鼠模型，其中Mst1基因在表达CD4的细胞中进行敲除。在这种模型中，Mst1基因的loxP位点被引入到Mst1基因中，并融合到荧光素酶报告基因（fl）中。CD4-Cre小鼠被用来特异性地将Mst1基因敲除在表达CD4的细胞中。因此，这种小鼠模型主要关注Mst1基因在T细胞和CD4阳性细胞中的功能。2.

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问该实验中胰蛋白酶起到什么作用，小鼠的肌肉组织是在哪一步腐蚀掉的，之前尝试做都存在肌肉残留的现象？

feixue7758527w

胰蛋白酶可以部分去除肌肉组织，残留可以用胰蛋白酶反复擦拭或者试试双氧水的应用的

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问请问大家给小鼠滴鼻能进气道吗？我的基本都进胃里了，不知道怎么养滴能进气道呢？

feixue7758527w

滴鼻可以进入气道的，小鼠滴鼻子的时候适当刺激一下试试，注意滴鼻子的角度，个人认为稍微快一点还是有效果的。

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问请问RNA-seq测序的结果如何进行分析？用什么软件和程序？参考文献有哪些？

土井挞克树

我们一般都选用KEGG，这个软件比较好操作

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问如何构建PB转座子介导的外源基因在哺乳动物细胞系中能够稳定表达的载体？哪些文献可以参考并列举？

橙汁儿青柠味

设计引物pcr后，将目的片段通过酶切连接或者同源重组连接到载体上，然后转染细胞后进行药筛即可。

4 回答460 围观

问WB泳道发黑，背景高

sswei

没有封闭好,但这个可能很小一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长背景太高,抗体浓度太大的原因。

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问退火温度梯度如何确定？

橙汁儿青柠味

一般是采用tm值-5开始，然后以2°为梯度增加

3 回答1117 围观

问dCas9与Cas9 m4有什么区别

sswei

dCas9与Cas9 m4的区别在于Cas9 m4的Cas9核酸内切酶的结构域与Cas9蛋白结合dna靶序列不同。dCas9通过抑制转录激活因子结合靶序列，形成基因暂时沉默，但当dCas9蛋白被细胞自然清除后，转录又可以恢复。

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问转录组学分组问题请教

橙汁儿青柠味

只要各组之间至少3个样品就可以满足了

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问circRNA的转录丰度是通过测量什么来得到的呢？

土井挞克树

测序就可以，测序后就能得到circ RNA丰度信息

3 回答264 围观

问用CD3CD28偶联磁珠刺激T细胞时包被beads的具体方法和步骤

周末也要努力呀

以下是一种常用的方法和步骤来包被这种磁珠：1. 准备所需材料：CD3 CD28偶联磁珠、细胞培养基、离心管、离心机、磁珠分离架、磁珠洗涤缓冲液。2. 将CD3 CD28偶联磁珠取出，并在4℃下保存。3. 将磁珠洗涤缓冲液加入离心管中，并将磁珠磁架放入离心管中。4. 用离心机将磁珠洗涤缓冲液离心，去除上清液。5. 重复步骤4，至少洗涤3次，以确保磁珠洗净。6. 将细胞培养基加入离心管中，使磁珠悬浮在

3 回答2754 围观

问菌液植酸酶磷酸酶抑制剂的添加方法

土井挞克树

一般注意添加抑制剂的时机，应该在通路激活之后有阳性反应之后进行抑制

3 回答478 围观

问使用深层多尺度图神经网络筛选药物的蛋白质作用靶点怎么进行预训练呀？

dxy_jgd0jwa6

请参考文章题目为“STRATEGIES FOR PRE-TRAINING GRAPH NEU NETWORKS”.这篇文章中，作者开发了一种新型的GNNs预训练策略。作者的策略成功的关键是将节点级和图级预训练与表现型GNN结合起来考虑。这确保了节点嵌入捕捉到了局部邻域语义，这些语义被汇集到一起以获得有意义的图级表示，反过来，这些表示又被用于下游任务。在多个数据集、不同的下游任务和不同的 GNN 架

4 回答391 围观

问大肠杆菌转化提质粒PCR有条带，酶切无条带

Keven轩

可能是PCR过程中太长，到系统紊乱，酶切位点发生突变

3 回答791 围观

问过氧化氢氧化损伤模型？

春风十里WW

请问楼主用过氧化氢建立氧化损伤模型成功了吗？重复性好吗？

6 回答509 围观

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