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求PCR技术应用大全
土井挞克树
1.多重PCR可实现在同一反应管中同时扩增多个不同的片段2. 反向PCR起初设计用于确定临近未知区域的序列。反向PCR有助于研究一个基因的启动子序列;致癌染色体重排如基因融合、异位或转移;及病毒基因的整合。3. 由于序列扩增的产量依赖于模板DNA的量,所以PCR常用于对样品中DNA进行定量,常用的应用是基因表达的定量
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问
细胞爬片免疫荧光有些问题请教下各位小可爱们。
申东熙老伯
血清和BSA都可以用来封闭,一抗稀释液的话,也可以用封闭液直接稀释。二抗的选择要根据一抗来确定,荧光素选实验室能拍出来的。
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问
细胞培养出现长条不会动的物体是什么呢
土井挞克树
培养基中的污染,可能是塑料纤维或者毛絮之类的
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问
关于内皮细胞的肾病模型
土井挞克树
造模流程操作流程: 1. CBSA 和弗氏完全佐剂制备乳剂,尾根部免疫100ug. 2.等待2周。 3.每隔一天静脉注射400ug cBSA(一共免疫5次) 4.收集16个小时内小鼠尿样 5.测定尿样中的尿蛋白 注:Balb/c可能会发生过敏性休克。这种情况,第14天免疫50ug cBSA就可以,16-22天继续免疫400ug。
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问
什么细胞系表达α-syn?
土井挞克树
脑皮质神经元好胶质细胞表达明显。
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问
GEO转录组数据处理问题
土井挞克树
我感觉你可以尝试一下进行对数转换。
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问
悬浮细胞可以做transwell吗
huarenqiang5
Transwell不建议用悬浮细胞做。
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问
加IPTG诱导摇床培养时要不要用未加IPTG的一起摇床培养做对照?
huarenqiang5
建议设置未加IPTG的一起摇床培养做对照组进行对比分析,这样实验结果更有说服力。
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问
为啥泛素化酶UB的wb都是一大长条
bamboopiggy
因为检测的是所有发生泛素化的蛋白条带
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问
流式凋亡求助!!
bamboopiggy
选区,把不需要的细胞群给去掉。可以用。
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问
为什么加了蛋白酶抑制剂蛋白还是会降解呢
bamboopiggy
你加了蛋白酶抑制剂以后,收的蛋白是怎么保存的?有没有反复冻融?
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问
QP引物设计
bamboopiggy
一般问题不大,只要遵循了qpcr引物设计的原则,并且出来的melt curve是单峰,就可以用
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问
怎样才能使琼脂糖凝胶电泳条带更清晰?
huarenqiang5
1.上样量适中,不要太多也不要太少,太多容易拖尾,太少跑出来条带不清晰。2.电压调低一些,跑的慢一些时间长一些。3.配胶琼脂糖浓度要适宜,目的基因较大浓度低一些,目的基因较小浓度高一些。4.选择合适的tae溶液。5.加样时要悬空,不要戳到胶孔边缘。
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问
PCR电泳无扩增条带?
bamboopiggy
你用阳参了么? 1.扩增的酶有没有问题,2,模板有没有问题,3,加没加引物,4,扩增的程序,尤其是annealing temperature和extension time是否正确?
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问
未被污染的肝癌细胞及肝细胞
bamboopiggy
肝癌细胞系未被污染的有很多啊,MHCC97H hepG2,PLC/PRF/5,但是我查到的肝细胞系基本都是hela污染的。
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问
质粒为模板,进行胶回收,没有带
申东熙老伯
重新配胶跑一次看看,可能上样的时候没吸到质粒。
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问
求助| Hela细胞生长特别缓慢应该如何处理?
bamboopiggy
如果血清和培养基相同,那大概率是你胰酶消化狠了。
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问
用刺激物刺激细胞看某个蛋白表达量的时候,设计了对照组0h,1h,2h刺激,对照组细胞什么时候提蛋白?
bamboopiggy
按照你刺激的时间收啊,刺激0h的,就0h收,1h的1h收,2h的2h收。ctrl的,0h收就好。
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问
小白求助,请问size exclusion chromatography结果图怎么看呢
bamboopiggy
这个结果图是洗脱后的wb图,你可以看洗脱的时间和蛋白的大小
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问
复苏的293T细胞为什么24h大多呈圆形,48h观察也还是圆形的多
c_Yeats
慢冻速融,复苏时候培养基提前预热。低速离心去处冻存液或者可以直接加入预热培养基的培养瓶中。复苏状态不佳时细胞未展开触角,可继续培养,或者复苏新的。
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