实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问控制植物某一性状或功能的基因如何筛选？求大概实验计划

huarenqiang5

首先要构建一个群体，如果是植物（特别是作物）还好说点。一般用含有目标基因（表型）的亲本和没有相应性状的标记的亲本的杂交后代构建群体。一般而言，如果是质量遗传的单孟德尔基因，用F2群体就够了。然后筛选大量两亲本间存在差异的标记，包括分子标记和表型标记等下面要在对群体的每一个系（如果是F2群体就是每一个单株）进行全部标记的分析，（PCR扩增电泳，蛋白质电泳等等）。最后把所得所有数据进行

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问WB实验内参出现很多条带

sswei

可能存在以下原因:①细胞传代次数过多会使得蛋白表达不同②体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式，如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等。③蛋白样本降解④可能检测到未经报道的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白⑤蛋白样品可能没有充分变性，从而残留多聚体

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问如何去除培养皿中的成纤维细胞(杂细胞)?

dxyc42u

诱导成纤维细胞使其失去贴壁习性，然后去除培养基

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问复苏了RAW巨噬细胞培养，用15%DMEM，可是长的好慢，没有明显操作失误，马上就要做转染，郁闷啊，求助高手，谢谢！！

huarenqiang5

主要考虑培养条件、培养基、血清、细胞这些是否存在问题。建议从这几方面找问题。

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问细胞培养基中加入的双抗多了或者少了会有什么影响

huarenqiang5

双抗加太多或太少，主要是影响细胞生长。

3 回答5036 围观

问请问每次复苏的细胞传代3到4次后出现分化严重，细胞与细胞之间连城片状，分化严重，还有少量细胞漂浮，不到24小时，培养基就变得很黄

huarenqiang5

主要考虑： 1.血清浓度，建议刚复苏的细胞血清浓度要高一点，然后慢慢恢复冻存前用的血清含量。 2.有可能冻存细胞的质量不太好，可以考虑复苏后的前几代用好一点的血清，然后等细胞状态好了在慢慢换回来。 3.PH值或存在细菌污染（主要是支原体污染）。

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问细胞裂解物中加入一抗，之后加入二抗，最后加珠子，那二抗可以促进一抗和蛋白的结合吗

dxyc42u

应该不可行，没没见其他人这样试过

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问悬浮培养的淋巴细胞总是聚团，是不是状态不好？应如何避免？怎样去除死细胞？

sswei

细胞培养瓶内的细胞出现抱团现象，一般可以从以下几个方面分析： 1、消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。4、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱

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问如何去除悬浮细胞中的死细胞

huarenqiang5

悬浮细胞死细胞去除方法有流式分选法、磁珠标记法、密度梯度离心法等。1、流式分选法：流式分选法是一种比较传统的分选方法，流式分选法是指可以通过荧光素标记不同的分子，从而通过调节电压等，将悬浮细胞死细胞分离出来。2、磁珠标记法：磁珠标记法是一种结合磁珠抗体去标记细胞的方式，通过磁珠标记法可以将死细胞带上磁珠，从而可以有效的把结合磁珠与没结合磁珠的细胞分离开来，有效筛选出死细胞。3、密度梯度离心法：正常

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问溴酚蓝形状很奇怪！！！求原因，影响结果吗

loveliufudan

一些可能导致溴酚蓝异常形状的原因包括：溴酚蓝溶液太老或者暴露在光线下过久，导致化学变化。溴酚蓝溶液受到污染，比如说有杂质、异物等。溴酚蓝溶液过浓或过稀，导致出现异常形状。这些异常形状可能会影响您的实验结果，因为溴酚蓝常常被用于测定DNA含量、蛋白质含量等实验中。因此，建议您在使用溴酚蓝之前，仔细检查其外观和清晰度，如果发现异常，最好不要使用，以免影响您的实验结果。

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问用了污染的血清，细胞状态不好，有什么办法拯救嘛？

huarenqiang5

这种情况只能换用新的好点的没有被污染的血清。

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问总 RNA 中除去基因组 DNA 实验中tris-hcl用的是多少浓度？

huarenqiang5

Tris -hcl 浓度一般为50 mM 。

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问96孔板 cck8实验加药方式

huarenqiang5

加药的两种方法： 1.把每一个孔的液体吸出来，再把用培养基配好的药加进去。吸液体的时候，把板子倾斜竖起来70°（方便你看），用200μl的枪调最大量程，套一个200μl枪头再套一个10μl枪头，从孔的最低点把液体吸出来。注意不要一下子把整个板的液体全吸出来，因为你加药前还要每一个浓度都混匀，很费时，最好不要让你的细胞空置太久，一般都是半个板地来。

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问cck8 药物稀释 DMSO相关问题

huarenqiang5

小于0.1ul可以忽略DMSO的影响。

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问WB二抗选择（做的是化学发光）

sswei

小鼠一抗选择的是羊，那么二抗应该是小鼠抗羊

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问qPCR阴性曲线为什么这样

sswei

可能的原因是：污染；引物二聚体。最好电泳确认下。如果是探针法，可能的原因基本上是污染。如果是引物二聚体，那么适当调低引物的加量，如果始终有引物二聚体峰，而且认为有影响的话，那么只能更换引物。如果是污染，那么要注意以下方面的操作。模板添加区和混合液配制区最好分开。做PCR时，在混合液配制区直接把阴性的管子盖给盖上，然后将分装好的各个管子拿到模板添加区，按照低浓度到高浓度的顺序添加。加模板时，每次都要

4 回答512 围观

问求助各位老师，3T3-L1脂肪细胞MTT怎么做？用脂肪前细胞和成熟脂肪细胞各做一遍吗？

dxyc42u

脂肪细胞做MTT一般做成熟脂肪细胞就行

3 回答452 围观

问检测培养细胞的HBV复制情况应该检测细胞内的还是培养液中的Hbv

dxyc42u

细胞内和培养液中的Hbv都检查，主要看细胞内的Hbv水平

3 回答338 围观

问离心后清洗沉淀3次用无菌水重悬，请问怎么重悬并用血球计数板计数制成浓度为1×107 cfu·mL-1的悬浮液？

dxyc42u

重悬时用少量无菌水，然后计数，计数完根据需要的浓度算再加入的无菌水即可

3 回答3928 围观

问如何确定已有目的基因的CDS在DNA上是完整的，而不是拼接得来的，即如何确定该目的基因的CDS在DNA上没有内含子的插入。

sswei

内含子外显子都是相对的，在可变剪切情况下有些内含子就变成了外显子。大多数物种有基因组数据库如拟南芥的TAIR网站（www.arabidopsis.org），在数据库中搜索基因名，上面有相对准确的外显子内含子标注（可变剪切的存在导致外显子内含子并不是绝对的）

3 回答1222 围观

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