实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问求助WB 大分子条带消失的原因？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1）胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应；2）蛋白质降解；3）上样量过多或过少及样品弥散。

6 回答1359 围观

问提rna测浓度后，260/230显示有杂质污染，这种情况下做荧光定量会有影响吗?

土井挞克树

少量杂质问题不大，荧光定量不会显影

4 回答437 围观

问请教，STAT3和p-STAT3 Western Blot蛋白检测

loveliufudan

通常情况下， STAT3 Western Blot检测所用的蛋白质提取物是包括细胞核、细胞质和细胞膜的总蛋白质。这是因为 STAT3是一种细胞内信号传导蛋白，存在于多种细胞结构中，因此要检测其全局表达水平，需要提取包括细胞核、细胞质和细胞膜的总蛋白质。在文献中，通常报道的是磷酸化状态的STAT3(p-STAT3)含量的变化情况，而不是总的STAT3含量。这是因为STAT3的磷酸化状态是其活性的指示

3 回答5209 围观

问组织样品如何提取mRNA

huarenqiang5

（一）动植物总RNA提取-Trizol法　　 1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。　　 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。　　 3、取上层水相于一新的离心管，按每ml

3 回答612 围观

问有做THP-1巨噬细胞M2极化成功的吗？

huarenqiang5

可以按以下步骤进行： 1、THP-1-M0 巨噬细胞分化将THP-1 细胞按1×106～2×106个/mL 密度接种于完全培养基中，置于37 ℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养，每2～3 d 换液。分别用50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L PMA 刺激THP-1 细胞48 h，诱导转化为M0型巨噬细胞，每组设置3个复孔，倒置相差显微镜下观察THP-1

3 回答1473 围观

问能告诉我在popgene这个软件里把等位基因从上图的数字换成用字母表示嘛

土井挞克树

直接从替换选项把基因的名称替换掉

3 回答527 围观

问有没有人用DIA-NN搜库的时候一直出现无法识别raw文件的情况啊

土井挞克树

可以下载一个修复的附件，就可以识别了

3 回答647 围观

问酶切只出现一条目的带

汤姆卜丽波

可能是啊，你再用连接酶连一下验证一下

4 回答1919 围观

问PK-15细胞传代后成片脱落

天一湖医者

如果冻存时间不是很长、冻存期间也没有没生过什么意外的情况，那么就要考虑是冻存前的细胞状态就不好；还有就是污染引起。

5 回答489 围观

问Logistic 回归中的校准曲线问题。

汤姆卜丽波

你这样标没问题啊，如果觉得不清楚可以把线调成点然后标点

3 回答531 围观

问求助 | 生存分析km曲线有差异，多因素cox回归p＞0.05

汤姆卜丽波

你这个样本量说明不了问题，增大样本量，误差小了，置信区间就会纳入，然后再看cox

3 回答686 围观

问做克隆转化，t载体连接转化后涂平板不长菌是什么原因？

汤姆卜丽波

这个长度挺大的，可能是没连上，重新设计一下引物

4 回答2798 围观

问为什么病毒感染细胞后收集上清进行密度梯度离心后检测病毒基因组拷贝数会有两个峰值？

汤姆卜丽波

可能是存在病毒基因重复，或者是细胞本身感染

3 回答373 围观

问怎么设计研究大鼠基因功能的实验呢

汤姆卜丽波

也可以用小干扰或者敲低，合成质粒转染细胞

3 回答476 围观

问求教:Meta分析数据合并

loveliufudan

在这种情况下，您需要将A文献中的亚组合并为一个整体亚组，然后将所有文献中相应的影响因素整体进行比较。您可以使用元回归（meta-regression）或子组分析（subgroup analysis）来探究这些亚组之间的异质性，进而确定是否可以将这些亚组合并为一个整体亚组。此外，您还可以使用敏感性分析（sensitivity analysis）来检验不同的合并方法是否对最终结果产生影响。需要注意的是

4 回答1469 围观

问请教一下各位老师关于ROC曲线位于参考线以下的问题

汤姆卜丽波

Roc就是该指标下的生存面积，原数据才是最准确的改动了后面的数据都对不上了

3 回答1507 围观

问审稿人有一条意见说需要编辑检查，应该怎么回？

汤姆卜丽波

Editorial checking 是说可能是编辑语法上有不恰当的地方或者逻辑框架有问题，你自己好好看一下顺一顺，然后说编辑完了就可以了

3 回答444 围观

问癫痫造模问题|如何确定癫痫大鼠造模成功呀？

汤姆卜丽波

一般的实验人员规定当动物符合Racine III级发作症状，维持1h以上，且在解除痫性发作后状态良好的动物则被称为造模成功的癫痫动物

3 回答1066 围观

问求解:肠道菌群属水平分析[Ruminococcus]和Ruminococcus有什么区别

汤姆卜丽波

打括号的是未鉴定清楚种属关系的

4 回答1679 围观

问求助贴，WB检测BV2细胞中TLR4的表达一直跑不出来

sswei

无条带的原因很多，要逐一排除哦，比如：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等，都会导致空白条带。

4 回答1078 围观

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