实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问肿瘤细胞与CD8细胞共培养

龙大人驾到

在体外共培养CD8+T细胞和贴壁肿瘤细胞时，CD8+T细胞可能会贴壁并难以清除，这可能会干扰细胞增殖实验的结果。下面是一些可能有助于解决这个问题的建议：1.在共培养之前，将肿瘤细胞先贴壁培养，使其形成单层的细胞，这样可以使CD8+T细胞与肿瘤细胞分开，减少CD8+T细胞贴壁的机会。2.增加清洗步骤，使用温和的方法去除CD8+T细胞贴壁。可以使用低速离心（如200 xg，5分钟）来收集细胞，然后使用

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问细胞呈曲线聚集生长

loveliufudan

这种情况可能是由于T25瓶内的细胞受到外界因素的影响，导致细胞生长受限，从而形成了聚集。以下是可能导致细胞聚集的一些原因：过度密集的细胞：如果细胞密度过高，它们可能会聚集在一起，因为它们之间的空间变得越来越小。这可能发生在T25瓶中，因为这种培养瓶的表面积相对较小，容纳的细胞数可能会超过适宜的数量。细胞黏附性差：某些细胞类型可能具有较差的黏附性，因此在培养瓶表面聚集的可能性较大。另一方面，96孔板

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问C57小鼠双结扎法慢性脑缺血模型

balalaLy

有专门的血管夹，时间需要摸索，缺血时间太长肯定会死

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问HE染色步骤

龙大人驾到

如果染色后只进行脱水而不使用二甲苯及中性树胶封固，可能会导致组织样本变形、移位和离散度增加，从而影响结果的准确性和可靠性。此外，染色后未封固可能会导致切片表面有氧化现象发生，使得切片在显微镜下呈现褪色或者发亮的现象。至于冰冻切片的厚度，一般建议在5-10 μm之间，较为适合HE染色。如果切片过薄，可能会导致组织破裂或者缺乏立体感，而过厚的切片则可能会导致染色效果不佳或者观察时不易聚焦。在选择切片厚

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问求助乳小鼠，豚鼠的脑室注射

loveliufudan

在进行小鼠和豚鼠脑内注射时，需要进行精确定位以避免注射错误，影响实验结果。以下是一些常用的小鼠和豚鼠脑定位图谱，供您参考：小鼠脑定位图谱：Paxinos and Watson小鼠脑定位图谱（第三版）Franklin and Paxinos小鼠脑定位图谱（第二版）The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates by Keith B.J. Franklin and

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问虾体中肝胰腺重量占百分之多少

huarenqiang5

一般肝胰腺占总体重的2-6%。

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问想问一下有人复苏活棘阿米巴吗？想知道怎么复苏的

loveliufudan

复苏活棘阿米巴的方法因实验条件和棘阿米巴的来源而异，下面是一些可能的复苏方法：1.体外培养法：棘阿米巴可以在一定条件下在培养基中生长和繁殖。在复苏棘阿米巴时，可以将其从样品中分离出来，然后将其悬浮于含有营养物质的培养基中，保持适当的温度和氧气浓度，使其自行复苏和生长。2.温度梯度法：棘阿米巴的复苏还可以通过在温度梯度中进行。例如，将被冷冻保存的样品放置在一系列温度梯度中，让其自然渐进地恢复活力。这

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问丙酮固定细胞会掉怎么办

loveliufudan

使用丙酮固定细胞时，需要注意固定时间和温度。固定时间太短或温度太低，可能会导致细胞未被充分固定而易于脱落。此外，使用PBS或者其他缓冲液洗涤细胞时，也需要轻轻摇晃孔板，避免过于强烈的震动导致细胞脱落。除了固定时间和温度，另外一些可能导致细胞易于脱落的因素包括：细胞密度过低或过高，都可能导致细胞易于脱落。转染试剂或细胞培养液的质量问题，可能会导致细胞易于脱落。细胞黏附能力较差或对特定基质无法黏附，也

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问IPP分析脂肪细胞大小！！

龙大人驾到

1.打开Image-Pro Plus软件，导入HE染色图像。可以通过点击菜单栏中的“File”-〉“Open”来打开图像。2.对图像进行预处理。在菜单栏中选择“Process”-〉“Enhance Features”-〉“Enhance Edges”，以增强图像的边缘特征。然后选择“Process”-〉“Filters”-〉“Median Filter”来去除图像中的噪声。3.分割脂肪细胞。选择“

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问SV40T转化人脐静脉内皮细胞

loveliufudan

SV40T转化的人脐静脉内皮细胞（SV40T-HUVEC）是一种常用的细胞系，而PUMC-HUVEC-T1和HUVEC则是人脐静脉内皮细胞的两个亚型。它们之间的主要区别在于来源、生长特性和生物学特性等方面，具体如下：来源：PUMC-HUVEC-T1和HUVEC均来自人脐静脉内皮细胞，但来源有所不同。PUMC-HUVEC-T1来自中国协和医科大学，而HUVEC则是来自其他研究机构或供应商。生长特性：

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问请问dc2.4细胞生长良好的时候是贴壁状态吗

土井挞克树

不是的，正常不是贴壁。类似于悬浮。

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问rDNA介导的整合型载体线性化位点怎么选择？

土井挞克树

选择rDNA上有，而载体上没有的酶切位点

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问构建过表达载体菌液测序出现问题

土井挞克树

因为通用性引物的特异性低，所以会出现重叠，更换引物再做

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问除293T以外，其他的膜融合效率较高的细胞，或者转染VSVG效率较高的细胞？

土井挞克树

我用的最多的是hela细胞，这个细胞转染成功率很高

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问如何从自己筛到的菌中获取一种酶的基因序列？

土井挞克树

先把菌裂解，获取基因序列，然后用已知引物进行配对

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问4因素3水平正交试验方差分析F值和显著性不显示怎么办。

土井挞克树

有选项的，你需要把这两项勾选上才显示

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问求救，专家说实验动物数量不够，应该怎样回答

土井挞克树

建议增加样本，或者减少说明的结论

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问请问20%脱脂奶粉保存菌种的方法具体操作是什么呢

土井挞克树

20%奶粉煮沸，冷却脱脂，分装小试管，每管1ml，8磅15分钟灭菌备用。将纯种菌接种于平板，37℃16小时培养，以接种环刮取菌苔2-3环于牛奶中混匀，试管用硅胶塞，冻存于普通冰箱冷冻室(-12℃-18℃)。使用时取出室温溶解，待部分溶解时即可取一环接种平板，并将试管再迅速冻存，这样可反复使用3-5次。此法一般菌株可存活48个月，少数如奈瑟氏菌、甲链、白喉等可存活14-30个月。

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问用油红O染色小鼠主动脉，为什么脂质都在血管外面呢？

龙大人驾到

在观察主动脉斑块的油红0染色显微镜下，脂质确实应该主要分布在血管内腔中。然而，如果您在观察时看到油红0染色的脂质分布在血管的外面，这可能有几个原因。首先，您可能没有将取材样本处理和切割得很好，这可能导致您在观察时看到的脂质位置不准确。其次，取材样本的油红0染色可能存在假阳性反应，这可能会导致您看到的染色位置不准确。此外，如果取材后处理或染色过程中的操作不规范或不正确，也可能会导致观察结果不准确。因

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问求助（要质粒的信该）

龙大人驾到

先介绍自己的实验目的和背景，让对方了解你的研究方向和需要。表达你对对方实验室的研究工作的兴趣，如果你能提到对方实验室的相关研究，会让对方更愿意帮助你。

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