实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问求助WB 大分子条带消失的原因？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1）胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应；2）蛋白质降解；3）上样量过多或过少及样品弥散。

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问求助289kDa蛋白转膜条件及分离胶浓度

huarenqiang5

289KDa蛋白转膜建议用 4%的浓缩胶，6％的分离胶，湿转140v恒压3h。

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问组织样品如何提取mRNA

huarenqiang5

（一）动植物总RNA提取-Trizol法　　 1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。　　 2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。　　 3、取上层水相于一新的离心管，按每ml

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问PK-15细胞传代后成片脱落

天一湖医者

如果冻存时间不是很长、冻存期间也没有没生过什么意外的情况，那么就要考虑是冻存前的细胞状态就不好；还有就是污染引起。

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问MSC需要的试剂？？？

dxy_xextz7w2

用的DEME培养基，胰酶，血清

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问Logistic 回归中的校准曲线问题。

汤姆卜丽波

你这样标没问题啊，如果觉得不清楚可以把线调成点然后标点

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问求助 | 生存分析km曲线有差异，多因素cox回归p＞0.05

汤姆卜丽波

你这个样本量说明不了问题，增大样本量，误差小了，置信区间就会纳入，然后再看cox

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问有没有接受英文文章的中文期刊

huarenqiang5

可以投《医药卫生》双语版这个。

3 回答318 围观

问有没有做过cell free表达蛋白的大神！

sswei

无细胞技术（cell-free）蛋白质表达上的应用，作为近年来单独列出的蛋白表达系统，主要用于表达膜蛋白等难以在细胞内获取的蛋白。膜蛋白在细胞间联系、表面识别、细胞骨架接触、信号传导、酶活性及物质运输中扮演了重要角色。由于其具有多种细胞功能，膜蛋白是非常理想的药物靶标。但是，膜蛋白的其复杂的优化过程使得纯化非常困难并且耗费时间。无细胞技术可以用来来获得高得率的可溶性的膜蛋白。在无细胞技术无细胞技

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问做克隆转化，t载体连接转化后涂平板不长菌是什么原因？

汤姆卜丽波

这个长度挺大的，可能是没连上，重新设计一下引物

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问基因回补具体实验步骤

huarenqiang5

副溶血弧菌基因回补实验方法的建立重组质粒的构建和鉴定利用限制性内切酶Xba I和 Hind Ⅲ对载体pBAD33和目的基因片段aphA、 opaR分别进行双酶切,将aphA和opaR基因酶切产物和质粒酶切产物按6:1摩尔比,经TDNA连接酶4℃连接12 h。连接产物化学转化入E.coli DH5a感受态细胞,涂布于Cm 10 ug/ml抗性的LB平板,37 ℃恒温倒置培养至出现单克隆

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问为什么病毒感染细胞后收集上清进行密度梯度离心后检测病毒基因组拷贝数会有两个峰值？

汤姆卜丽波

可能是存在病毒基因重复，或者是细胞本身感染

3 回答350 围观

问怎么设计研究大鼠基因功能的实验呢

汤姆卜丽波

也可以用小干扰或者敲低，合成质粒转染细胞

3 回答427 围观

问求教:Meta分析数据合并

loveliufudan

在这种情况下，您需要将A文献中的亚组合并为一个整体亚组，然后将所有文献中相应的影响因素整体进行比较。您可以使用元回归（meta-regression）或子组分析（subgroup analysis）来探究这些亚组之间的异质性，进而确定是否可以将这些亚组合并为一个整体亚组。此外，您还可以使用敏感性分析（sensitivity analysis）来检验不同的合并方法是否对最终结果产生影响。需要注意的是

4 回答1412 围观

问请教一下各位老师关于ROC曲线位于参考线以下的问题

汤姆卜丽波

Roc就是该指标下的生存面积，原数据才是最准确的改动了后面的数据都对不上了

3 回答1404 围观

问审稿人有一条意见说需要编辑检查，应该怎么回？

汤姆卜丽波

Editorial checking 是说可能是编辑语法上有不恰当的地方或者逻辑框架有问题，你自己好好看一下顺一顺，然后说编辑完了就可以了

3 回答415 围观

问癫痫造模问题|如何确定癫痫大鼠造模成功呀？

汤姆卜丽波

一般的实验人员规定当动物符合Racine III级发作症状，维持1h以上，且在解除痫性发作后状态良好的动物则被称为造模成功的癫痫动物

3 回答1001 围观

问求解:肠道菌群属水平分析[Ruminococcus]和Ruminococcus有什么区别

汤姆卜丽波

打括号的是未鉴定清楚种属关系的

4 回答1596 围观

问求助！细胞污染

dunima

大多数细菌对紫外还是很敏感的，所以影响不大，但除了台子消毒以外，环境最好也紫外照一下

10 回答346 围观

问miRNA的逆转录内参在10左右，目的miR测不出来，怎么搞

dxy_rt9z23i7

我也用的诺唯赞的这两个试剂盒，逆转引物用的诺唯赞他们的软件设计的。内参和目的miRNA的引物要分开两个管子逆转，不然的话会有误差。本来基因组里内参的表达量和你的目的miRNA的表达量是不一样的，内参逆转产物之后点Qpcr的时候是要稀释的，目的miRNA的表达量一般都比较低，不用稀释，我自己是这么做的，能做出来。

4 回答475 围观

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