实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问插入序列与egfp之间序列有很多碱基会引起突变吗

juyue2010

可能会，最好是将中间序列去掉，仅保留少量碱基，

3 回答485 围观

问免疫层析的那些示意图是用什么画的呀，我现在想画个免疫层析的试纸条，找不到合适的软件

土井挞克树

可以用image软件进行绘制示意图。

2 回答413 围观

问请问细胞免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞嘛，以及细胞固定后可以冻存嘛？

huarenqiang5

免疫荧光可以用冻存再恢复的细胞。

4 回答616 围观

问投稿要求整张膜，如果二抗种属不一样，可以一起混合孵育吗？

huarenqiang5

二抗种属不一样不建议一起混合孵育。

3 回答106 围观

问pet28a质粒dna提取浓度低

土井挞克树

必须增加菌液量，目前来看就是上样量太少了，增加样本量

3 回答2391 围观

问3t3诱导：图1：诱导第六天，为什么细胞不变圆而是胖梭形？第一次诱导时间太短？图2:诱导第十天，这些白色小点是脂滴吗？也是梭形

土井挞克树

考虑是细胞内的梭形脂滴，延长第一次诱导时间看一下

4 回答358 围观

问co-ip时出现的IgG重链条带怎么解决

土井挞克树

换另外一种二抗的IgG，是非特异性结合

4 回答1853 围观

问southern blot 检测HBV的DNA变化，RcDNA和nsDNA的条带怎么分析？是看rc还是ns？

土井挞克树

如果看的是dna变化的话，一般是看rc。

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问做免疫荧光经验求分享？

土井挞克树

如果核定位不好,建议封闭和打孔合为一步,即在封闭液中添加0.5% TRITON-100,37度封闭2小时,加一抗后最好4度孵育过夜(16小时)。

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问请教下大神，大家用的茜素红染色液是买的配好的溶液还是粉剂呢？有推荐的吗？另外酸性/中性/碱性都有，哪一种适合染培养细胞的矿化结节？

huarenqiang5

一般是购买茜素红素粉，然后自己进行配制，茜素红S 1g 蒸馏水 90ml 1%氢氧化铵 10ml此液PH值应在6.3左右，此溶液至少可保存1个月。

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问WB实验使用的膜哪种最好啊？

huarenqiang5

Pvdf膜跟nc膜有的区别及选择：一、硝酸纤维素NC膜的优点1.使用方便，操作简单，兼容多种检测方法，与 PVDF 膜相比，不需要甲醇浸泡过程，这样使得那些需要亲水环境下的蛋白质转移。在转移前，仅需要在水中简单润湿，然后置于转移缓冲液中，不需要其他的预湿步骤了。2. 背景低：除了具有高结合力外，硝酸纤维素膜本身产生的背景非常低，膜特有的表面性质保证了优异的信噪比，在膜洗脱时不需要严格的洗脱条

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问免疫电泳实验中，电泳条件已经优化，但仍然无法分辨出目标蛋白。我该如何提高分辨率和灵敏度？

土井挞克树

可以在电泳之前应用免疫沉淀法将抗原进行纯化

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问免疫荧光实验中，如何选择最佳的探针以获得最高的灵敏度和特异性？

huarenqiang5

荧光探针的选择主要从以下几个方面考虑。（1）仪器所采用激光器的类型：应根据仪器采用激光器的类型进行探针选择。如共聚焦激光扫描显微镜采用氪/氩离子激光器，激发波长为488nm，568nm，647nm，可激发多种荧光探针。（2）荧光探针的光稳定性和光漂白性：在进行荧光定量和动态荧光监测时，要求荧光探针有较高的光稳定性，也可通过减少激光扫描次数或降低激光强度的方法，来减轻光漂白的程度。但在进行膜流动性或

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问原核表达IPTG诱导问题求助

sswei

反应条件较复杂，特别是对自己设计的引物来说，选择合适的退火温度，是需要慢慢摸索的，一般根据计算的退火温度降低5~10℃来进行首次扩增，如果出现了目的条带，且有杂带时，在逐步提高退火温度，以提高反应的特异性。此外，还有反应体系，电泳条件，时间等等因素。

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问髓核干细胞sirna转染

huarenqiang5

可以借鉴一下这篇文章《骨髓间充质干细胞的转染》一、试验材料：1、LB液体造就基：称取蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调整PH到7.5，加去离子水定容至1L，高压灭菌20min.2、LB平板造就基：LB液体造就基中按1.5%的浓度参与琼脂，加热溶解，进行高压灭菌。取出后趁热在无菌条件下，倒入无菌的平皿中，每套平皿中参与12-15ml，

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问【求助】PHN大鼠造模用Fx1A抗体

loveliufudan

注射抗Fx1A血清时，需要将大鼠麻醉，并在15-30秒内将0.4毫升/100克体重的抗Fx1A血清注入尾静脉。产生疾病的程度与剂量有关，因此重要的是要完全注入所需剂量的抗体。推荐剂量已经过测试，能够产生如数据表所述的疾病。

3 回答234 围观

问snail泛素化

dxy_xextz7w2

检测泛素化不是检测特定的条带，泛素化的范围广因此要检测整个蛋白泳道的

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问土壤微生物分离与纯化相关问题

loveliufudan

分离不同类型菌种的培养基应该根据所要分离的微生物的特性进行选择。一般来说，可以选择一些通用的培养基如TSA（Tryptic Soy Agar）、NA（Nutrient Agar）等，以及一些选择性培养基如MacConkey Agar、Sabouraud Agar等，这些培养基可以分离出不同类型的微生物，如革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌等。另外，还可以选择一些特殊的培养基如土壤菌培养基、氮素菌培养

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问为什么跑蛋白，STAT3含量基本不变？

龙大人驾到

这是因为STAT3与p-STAT3的含义不同。STAT3是一种蛋白质，其含量在治疗前后基本不变。而p-STAT3是一种磷酸化修饰形式的STAT3，其含量会随着外界信号刺激而发生变化。当外界信号刺激到细胞时，激活的激酶会磷酸化STAT3，将其转化为p-STAT3，p-STAT3进入细胞核后调控相关基因的转录。因此，检测STAT3和p-STAT3可以了解到外界信号刺激是否引起了STAT3的磷酸化修饰。

3 回答3449 围观

问我想问一下微球体是什么实验

龙大人驾到

微球体实验是一种实验方法，用于研究微小颗粒物质的性质和行为。该实验主要通过制备一种具有特定大小、形状和表面性质的微小球体，然后使用不同的测量技术和设备来研究其物理、化学和生物特性等方面的信息。这种实验方法可以应用于多个领域，如材料科学、生物医学、环境科学和纳米技术等。

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