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实验问答

27,885,000 科研人在看

问Tau磷酸化位点很多，抗体怎么选，有什么区别？

土井挞克树

就我所做的tau抗体来说说我觉得你选择tau1,tau5,AT8三种抗体就可以了tau5可以作为tau总蛋白的定量而tau1，磷酸化位点为ser199/202.在体时主要标轴突的。

2 回答6151 围观

问FITC-CM-Dextran 怎么配

huarenqiang5

7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

2 回答933 围观

问western blot免疫印迹实验，目的带很弱，要怎么加强

土井挞克树

增强上样浓度和上样量，延长一抗孵育时间

3 回答801 围观

问请问一下柠檬酸钠比色法具体操作过程？

loveliufudan

柠檬酸钠比色法是一种常用于测定葡萄糖含量的方法，下面是具体操作步骤：首先将样品制备好，一般是将待测样品经过必要的处理，比如去除杂质、稀释等，使其适合测定。准备一定浓度的柠檬酸钠试剂，通常是1%柠檬酸钠溶液。将样品加入比色管中，再加入适量的柠檬酸钠试剂，混匀。将比色管放入沸水中加热10分钟，使其反应完全，然后取出冷却至室温。加入10倍体积的稀释液，混匀后使用分光光度计在波长为520nm处测定吸光度值

2 回答1457 围观

问免疫荧光实验中，目标蛋白荧光很弱怎么办

loveliufudan

如果在免疫荧光实验中，目标蛋白的荧光很弱，可能有以下几个原因：次生抗体或探针浓度不够：次生抗体或探针是检测目标蛋白的关键试剂，如果浓度不够，可能无法充分与目标蛋白结合，导致荧光信号很弱。建议适当调整试剂的浓度，以确保充分结合和信号强度。特异性抗体质量不佳：特异性抗体质量不佳可能导致与非目标蛋白的结合，或者结合不充分，从而导致荧光信号很弱。建议更换高质量的特异性抗体，或者优化抗体结合条件，以提高信号

3 回答2057 围观

问免疫组化实验中，出现边缘效应怎么办？

loveliufudan

这可能是由于标本处理、抗体染色、显微镜成像等因素引起的。以下是一些可能的解决方法：在标本处理过程中要尽可能避免损伤标本边缘，特别是在切片过程中。在抗体染色前，将标本边缘用胶带覆盖，以减少标本边缘的信号干扰。在显微镜成像时，尽可能调整焦距和曝光时间，确保标本中央和边缘区域的信号平衡。如果使用数字成像系统，可以对图像进行后处理，如修剪边缘区域或调整图像亮度和对比度等。对于细胞免疫组化，可以尝试调整细胞

3 回答1534 围观

问请问配制1%的STZ溶液如何计算试剂量

loveliufudan

以下是柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的配制方法和计算步骤：首先确定你要制备多少升缓冲液，比如说1升。根据你要制备的升数和缓冲液的配方，计算出你需要的柠檬酸一水和柠檬酸三钠二水的质量，可以通过配方中的摩尔比例计算。具体计算公式为：质量（g）= 摩尔质量（g/mol）× 摩尔数（mol）× 升数（L）例如，你要制备1升柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH为6.5，配方为A液：0.1 mol/L 柠檬酸一水，B液：0.

2 回答2451 围观

问热蛋白组学实验，在用液氮冻融裂解hepG2细胞后，BCA定量细胞蛋白浓度过低是什么原因呢？

huarenqiang5

主要考虑：1.可能细胞状态不好；2.蛋白与蛋白间性质差异大；3.BCA反应非线性，测定时可能出现偏差，要精度准确，做标准曲线时的点设置多些；4.试剂BCA，一般最低检测限5ug/ml，灵敏度要达到1ug/ml，必须采取加强法测定，比如样品多加几倍。

3 回答1031 围观

问最近遇到了小鼠免疫问题

huarenqiang5

主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间，从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

3 回答353 围观

问有淋巴细胞做抗原实验

huarenqiang5

免疫同一只小鼠建议用同一品类的血液提取的淋巴细胞。免疫小鼠1.0×10-2.5×10 个脾细胞。

3 回答629 围观

问酶放大免疫实验技术

huarenqiang5

荧光标记技术：是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。

3 回答814 围观

问用钙离子浓度检测试剂盒有结果，而且实验组和对照组差异很大，但是做硝酸银染色都是阴性

huarenqiang5

你的这个情况主要考虑可能是操作问题导致，建议重新做对比分析一下。

3 回答477 围观

问杂交瘤细胞什么时候进行传代？

huarenqiang5

当细胞处于对数生长的中期时，可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。

4 回答814 围观

问transwell染色后用PBS洗三遍晾干后有结晶是啥原因？

loveliufudan

结晶的出现可能是由于使用的PBS中含有过多的离子，这些离子在干燥过程中结晶，导致结晶形成。为了避免结晶的出现，可以尝试使用去离子水代替PBS进行洗涤，并在洗涤后彻底干燥Transwell膜。另外，也可以调整PBS的pH值，以确保其最大限度地溶解其中的盐类。

3 回答965 围观

问激光共聚焦显微镜与荧光显微镜显示的染色结果为何不同？

huarenqiang5

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领

3 回答1291 围观

问做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照？

土井挞克树

可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些

3 回答1241 围观

问荧光免疫组化实验中，和核染对照组超过多少百分比一致才认为目的蛋白是核表达？

huarenqiang5

和核染对照组一般要超过80%时才表示目的蛋白是核表达。

3 回答317 围观

问乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法

土井挞克树

除了化学法，还可以做免疫荧光实验，看抗原的表达强度，来检测阳性的强弱

3 回答1112 围观

问请问悬浮细胞（例如真菌的原生质体）应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉？

huarenqiang5

采用多聚甲醛固定法进行固定：A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次，200 g 离心 5 分钟；重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为 1x106/ml，室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次；E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透

3 回答740 围观

问流式中，标记的抗体已经验证过，但却无法正确鉴定特定类型的免疫细胞。我该怎么确定鉴定的准确性？

sswei

如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞。但一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

2 回答738 围观

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