银河剃须刀
体系:1640培养基+50U/ml IL-2+200ng/ml抗CD3和抗CD28抗体+1%双抗
细胞种板浓度:1.undefined10^6个/ml
提取方式:trizol提取法
土井挞克树
更换提取方法,或者增加上样量。
loveliufudan
CD4+T细胞RNA提取的浓度和纯度太低可能是由于以下原因之一导致的:
细胞密度过高或过低:过高的细胞密度可能会影响RNA的提取和纯化,因为它会导致Trizol试剂的完全消耗。而过低的细胞密度可能会导致RNA含量过低。您可以尝试优化细胞密度,以便在提取RNA时获得最佳结果。
反应时间过长或过短:RNA提取过程中的反应时间可能会影响RNA的提取和纯化。反应时间过短可能会导致不足的RNA释放,而反应时间过长则可能会导致RNA降解。您可以尝试优化反应时间,以获得最佳结果。
溶解样品的时间不足或过度:您需要确保在Trizol试剂中溶解样品的时间足够长,并且在RNA沉淀过程中不要将样品过度溶解。
双抗的含量和质量:您可以尝试优化双抗的含量和质量,以提高RNA的提取和纯化效率。
Trizol试剂的质量:您可以尝试使用不同的Trizol试剂或其他RNA提取试剂以提高RNA的提取和纯化效率。
操作技巧不熟练:操作技巧的不熟练可能会影响RNA的提取和纯化效率。您可以尝试参考一些RNA提取技巧视频或参加专业的RNA提取技术培训,以提高技能。
总之,要优化CD4+T细胞RNA的提取和纯化效率,需要综合考虑多个因素,逐步尝试调整每个步骤并进行优化,直到获得最佳结果。
huarenqiang5
建议:
1.用无水乙醇;
2.多加点氯仿,颠倒混匀的时间长一点,取上清不要贪多;
4.组织的话基本只要米粒大小就好(多了会影响提取的纯度),细胞6cm皿的细胞加1ml Trizol就好。
3.操作环境A、尽量在超净工作台上操作,避免环境RNAnase污染,B、全过程必须在冰上操作,且速度要块;
5.操作手法,(在最后检测RNA质量和浓度时,间隔时间多几秒,最后得到的数据差距就很大),当然中间的操作过程也很重要,比如吸取水相层时要温柔再温柔,在洗涤时尽量弹匀等。