实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问Tau磷酸化位点很多，抗体怎么选，有什么区别？

土井挞克树

就我所做的tau抗体来说说我觉得你选择tau1,tau5,AT8三种抗体就可以了tau5可以作为tau总蛋白的定量而tau1，磷酸化位点为ser199/202.在体时主要标轴突的。

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问96孔板如何确定合适的细胞接种密度和药物干预时间?

loveliufudan

确定适当的细胞接种密度和药物处理时间是细胞实验设计中非常重要的步骤。96孔板可以用来进行高通量筛选实验，其中可以同时测试多个样品以及不同处理条件下的细胞生长情况。以下是一些方法来确定适当的细胞接种密度和药物处理时间：文献调研：在设计实验之前，可以查找类似实验的文献来获取参考信息。通过文献中的描述，可以了解到哪些细胞类型适合在96孔板上进行实验、推荐的接种密度和药物处理时间等信息。实验前的预测试验：

5 回答3209 围观

问请问一下柠檬酸钠比色法具体操作过程？

loveliufudan

柠檬酸钠比色法是一种常用于测定葡萄糖含量的方法，下面是具体操作步骤：首先将样品制备好，一般是将待测样品经过必要的处理，比如去除杂质、稀释等，使其适合测定。准备一定浓度的柠檬酸钠试剂，通常是1%柠檬酸钠溶液。将样品加入比色管中，再加入适量的柠檬酸钠试剂，混匀。将比色管放入沸水中加热10分钟，使其反应完全，然后取出冷却至室温。加入10倍体积的稀释液，混匀后使用分光光度计在波长为520nm处测定吸光度值

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问大分子量蛋白转移效率低的解决方法

loveliufudan

以下是一些可以尝试的方法来提高大分子量蛋白的转移效率：增加电流：使用更高的电流可以加快蛋白质的转移速度。一般情况下，使用200 mA或更高的电流可以提高转移效率。延长转移时间：由于大分子量蛋白的迁移速度较慢，需要更长的转移时间来完成转移。一般来说，大分子量蛋白的转移时间需要至少1小时或更长时间。使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度：一些缓冲液（如Tris-Glycine）中含有特殊的离子浓度梯度，可以

3 回答167 围观

问条带立即出现肉眼可见的黄色，但是显影仪器上怎么也拍不出来条带

loveliufudan

如果在显影仪器上无法拍出实验显影内参条带，可能有以下几个原因：显影时间不够长：有时候，即使条带已经显现，但显影时间仍然不够长，导致显影强度不足，无法被显影仪器检测到。建议在检测之前将显影时间适当延长，以确保显影强度充足。显影条件不合适：不同的内参条带可能需要不同的显影条件（例如显影时间、底物浓度等），如果显影条件不合适，则可能无法被显影仪器检测到。建议根据实验要求，对显影条件进行优化和调整。显影仪

3 回答426 围观

问星形胶质细胞培养交流

loveliufudan

针对这种情况，建议可以采取以下措施：采用低速离心：如果实验需要离心，可以采用低速离心。低速离心可以避免对细胞的机械损伤，同时可以去除杂质和细胞碎片。选择适合的离心管或离心管衬垫：有些离心管或离心管衬垫比较适合星形胶质细胞的离心，可以避免细胞损失。可以向供应商咨询或者尝试不同的离心管或离心管衬垫。

2 回答513 围观

问免疫荧光实验中，目标蛋白荧光很弱怎么办

loveliufudan

如果在免疫荧光实验中，目标蛋白的荧光很弱，可能有以下几个原因：次生抗体或探针浓度不够：次生抗体或探针是检测目标蛋白的关键试剂，如果浓度不够，可能无法充分与目标蛋白结合，导致荧光信号很弱。建议适当调整试剂的浓度，以确保充分结合和信号强度。特异性抗体质量不佳：特异性抗体质量不佳可能导致与非目标蛋白的结合，或者结合不充分，从而导致荧光信号很弱。建议更换高质量的特异性抗体，或者优化抗体结合条件，以提高信号

3 回答1842 围观

问免疫组化实验中，出现边缘效应怎么办？

loveliufudan

这可能是由于标本处理、抗体染色、显微镜成像等因素引起的。以下是一些可能的解决方法：在标本处理过程中要尽可能避免损伤标本边缘，特别是在切片过程中。在抗体染色前，将标本边缘用胶带覆盖，以减少标本边缘的信号干扰。在显微镜成像时，尽可能调整焦距和曝光时间，确保标本中央和边缘区域的信号平衡。如果使用数字成像系统，可以对图像进行后处理，如修剪边缘区域或调整图像亮度和对比度等。对于细胞免疫组化，可以尝试调整细胞

3 回答1122 围观

问请问配制1%的STZ溶液如何计算试剂量

loveliufudan

以下是柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的配制方法和计算步骤：首先确定你要制备多少升缓冲液，比如说1升。根据你要制备的升数和缓冲液的配方，计算出你需要的柠檬酸一水和柠檬酸三钠二水的质量，可以通过配方中的摩尔比例计算。具体计算公式为：质量（g）= 摩尔质量（g/mol）× 摩尔数（mol）× 升数（L）例如，你要制备1升柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，pH为6.5，配方为A液：0.1 mol/L 柠檬酸一水，B液：0.

2 回答2002 围观

问transwell染色后用PBS洗三遍晾干后有结晶是啥原因？

loveliufudan

结晶的出现可能是由于使用的PBS中含有过多的离子，这些离子在干燥过程中结晶，导致结晶形成。为了避免结晶的出现，可以尝试使用去离子水代替PBS进行洗涤，并在洗涤后彻底干燥Transwell膜。另外，也可以调整PBS的pH值，以确保其最大限度地溶解其中的盐类。

3 回答861 围观

问如何通过免疫组化实验来确定某个蛋白质是一个潜在的免疫识别分子？

土井挞克树

可以使用已知抗体去验证未知的免疫识别分子，如果产生了特异性结合，那么可以确定这个蛋白是潜在的免疫识别分子

1 回答348 围观

问做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照？

土井挞克树

可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些

3 回答1041 围观

问乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法

土井挞克树

除了化学法，还可以做免疫荧光实验，看抗原的表达强度，来检测阳性的强弱

3 回答639 围观

问Marker没有完全转上，这是什么原因？！！！有一部分在胶上

天一湖医者

首先排除Marker自身问题.你的Marker是否是点在最边上的泳道? 如果在最边上有可能是你的滤纸比膜小, Marker那里没有闭合导致的. 或者边缘位置的膜和胶没贴紧,有气泡, 所以转不过去. 你把Marker点在中间位置看看情况.

5 回答264 围观

问脱氧核酶实验是什么实验？

土井挞克树

脱氧核酶实验是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力，进行未知识别的实验方法。在恶性肿瘤的研究方面有巨大前景

3 回答501 围观

问请问，组化拍片，DAB颜色很深，不明亮，像树皮的颜色。我的DAB是5s左右就放入PBS洗了，不知道为什么会这样。

sswei

显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间。

4 回答360 围观

问请问悬浮细胞（例如真菌的原生质体）应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉？

huarenqiang5

采用多聚甲醛固定法进行固定：A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次，200 g 离心 5 分钟；重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为 1x106/ml，室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次；E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透

3 回答510 围观

问流式中，标记的抗体已经验证过，但却无法正确鉴定特定类型的免疫细胞。我该怎么确定鉴定的准确性？

sswei

如果是外周/脾脏/淋巴结的免疫亚群鉴定，在进行红细胞裂解或者梯度密度离心后所获得细胞都是纯度非常高的PBMC，可以在流式细胞仪上通过FSC和SSC这2个形态学通道明确的选出免疫细胞。但一些病人的样本或者是一些处理不好的样本，很难从FSC和SSC通道上获得明确的PBMC形态，此时就应该检测CD45来严谨的gate出免疫亚群了。

2 回答421 围观

问ELISA实验中，怎样选择最佳的包被抗原浓度以获得最高的灵敏度和特异性？

龙大人驾到

1. 初始的抗原包被浓度可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列抗原包被浓度的实验，产生一组数据，以评估不同浓度下的ELISA信号，并确定最佳浓度。3. 可以通过稀释抗原溶液来获得不同的抗原包被浓度。例如，对于包含1mg/ml抗原的溶液，可以通过将其与缓冲液按比例混合并逐步稀释到0.1mg/ml、0.01mg/ml等浓度。4. 对于每种稀释物，与一定数量的特异性抗体进行结合。结合后，可

4 回答3067 围观

问病毒中和实验中，如何确定最佳的病毒和细胞比例以获得最高的病毒中和效果？

龙大人驾到

1. 初始的病毒和细胞比例可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列病毒和细胞比例的实验，产生一组数据，以评估不同比例下的中和效果，并确定最佳比例。3. 可以通过稀释病毒溶液来获得不同的病毒浓度。例如，对于包含106个病毒的溶液，可以通过将其与相应量的培养基混合并逐步稀释到10-6的浓度。4. 对于每种稀释物，与一定数量的细胞进行接种。接种后，可以根据实验需要和方法使用不同的检测方法（例

3 回答645 围观

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