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问
CD4+T细胞rna提取浓度和纯度总是太低如何解决?
土井挞克树
更换提取方法,或者增加上样量。
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问
双荧光素酶实验裂解细胞前有必要用PBS清洗细胞吗?
土井挞克树
有必要,可以大部分清理掉污染和杂质的干扰
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问
T载体连接转化后挑选阳性菌落跑菌液PCR,然后送测序,测序结果与参考序列比,长度少了100bp左右,这是为啥呢?
土井挞克树
考虑体系内存在降解,可能是在pcr过程中断裂
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问
细胞免疫荧光实验抗原占位
土井挞克树
一般不存在,抗原占位多数可以通过提高抗体的特异性来避免
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问
请问完全培养基培养条件下,dc2.4细胞是可以不断增殖的吗?我感觉我的dc细胞长得和肿瘤一样快,不知道是不是被肿瘤细胞污染了
loveliufudan
DC2.4是一种小鼠树突状细胞(DC)系列,该细胞系来源于小鼠的转基因肿瘤,可以通过不断培养来保持细胞增殖。然而,这种细胞系的增殖速度比其他小鼠DC系列要快,可能会让人误认为被肿瘤细胞污染了。因此,需要通过一些特定的标志物和功能特征来鉴定DC2.4细胞是否具有树突状细胞的特征,例如:CD11c、CD80、CD86等分子的表达、分泌IL-12和IL-10等免疫调节因子。此外,在进行细胞培养时,需要注
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问
内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么?
土井挞克树
一般灭活需要10min,重复三次。
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问
多聚甲醛固定组织一定要在4度吗?可以在室温下固定吗?
土井挞克树
不建议,会加速组织脱水,影响后续实验
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问
求问如何明确目的蛋白的哪个功能结构域起作用?
土井挞克树
可以做肽链分解或者肽链合成来验证
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问
细胞铺96孔板,隔天换基础培养基,换完后个别孔里的细胞中间状态就不一样了,请问是什么原因呀?中间这种细胞后面加MTT染色就
土井挞克树
考虑是加入的浓度不合适,对细胞产生了分选,可以稀释后加入
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问
请问有没有大佬有新物体识别的好方法,我的一批正常小鼠对新物体并不是特别感兴趣,甚至更喜欢旧物体?
土井挞克树
尽量保证环境不变只变物体,会提高接受能力
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问
细胞免疫荧光染色的结果分析?
土井挞克树
首先考虑的是核蛋白破裂,破裂后就会造成核蛋白污染,产生这种结果
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问
细胞涂片标本做免疫组化染色的方法
土井挞克树
免疫组化染色是用一抗与被检测组织中目的蛋白抗原结合,然后HRP等标记的二抗与一抗进行结合,最后通过DAB显色反应,进而确认所要检测蛋白抗原的定位、半定量等目的而石蜡切片是用he染色,不存在抗体结合,效果差
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问
请教大鼠鞘内腺相关病毒注射怎么操作呢?是需要鞘内置管 还是可以像小鼠一样定位注射?
土井挞克树
如果需要联系注射建议置管。如果是单次注射可以不置管
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问
6E,8E质粒载体是干嘛用的,怎么使用?实验步骤具体操作?
土井挞克树
质粒载体是辅助dna片段序列插入的载体。
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问
免疫组化染色。冲洗的时候因为怕脱片所以我的片子有点干了,然后染出来结果就很不好,是因为干片么
土井挞克树
大概率是因为干片,片子太干染色非常容易失败
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问
免疫组化,我染的标本总是会脱片一部分,想问一下煮片子的时候最适温度大概是多少
土井挞克树
一般70-80摄氏度是最好的,不建议太高温度
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问
LLC肺癌组织如何分离为细胞做流式?
土井挞克树
不考虑后续的话建议胰酶,胶原酶、透明质酸酶和DNA酶都加用,可以裂解的好一些
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问
免疫荧光实验,整个细胞片都出现荧光亮点原因?
土井挞克树
抗体特异性太差,更换特异性高的抗体再做。
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问
免疫组化问题求助??
huarenqiang5
100℃水浴加热法,一般不会导致组织里面的蛋白、酶等生物活性物质失活。沸热修复电炉或水浴锅加热0.01柠檬酸钠缓冲液(ph6.0)至95℃左右,放入组织芯片加热10-15分钟。
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问
小鼠脊柱骨折模型制备需要注意些什么,才能提高模型成功率
土井挞克树
需要注意制备的时间,一般是新生鼠一个月后进行制备比较好
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