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实验问答

25,025,284 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问RNA中有DNA污染的处理方式有哪些

huarenqiang5

彻底去除基因组 DNA 最为可靠的方法是采用 DNase I消化。 DNase On Column Kit 可配合 HiPure RNA抽提试剂盒一起使用。组织/细胞样品经裂解液裂解后，转移至 HiPure RNA Column吸附 RNA，加入 DNase至柱子的滤膜中消化去除 DNA，然后加入洗涤液洗涤去除 DNase 和降解的 DNA。 1

3 回答1846 围观

问克隆PCR产物的最优条件是什么？

huarenqiang5

插入最佳片段后室温保温1h，或4℃过夜。在这2种温度下，缺T-凸出端的载体会自连，产生蓝斑。室温保温1h能满足大多数克隆要求，为提高连接效率，需4℃过夜。

4 回答505 围观

问原代细胞培养贴壁性差如何改进？

sswei

大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h，细胞不贴壁有好多种原因的：1、如果你用玻璃培养瓶培养的话，有可能你的瓶子没处理好；建议你用一次性培养瓶，进口的都可以。2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化，就是放在37度里消化，时间比较短不好控制，传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里，一般在几个小时以上，胰酶浓度也有要求的，一般都

3 回答803 围观

问重链曝不出来目的条带却能曝出来

土井挞克树

可能的原因有 3 个： 1）一抗效价不好。 2）抗原太稀。 3）封闭时间过长。解决的方法： 1）换用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原浓度。 3）缩短封闭时间，封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时，或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

3 回答334 围观

问GM-DC诱导失败无数次，求大神指点

huarenqiang5

建议开始用不含GM-CSF培养至少3小时至几十小时后再加GM-CSF进行。

4 回答247 围观

问做PE通道的正选细胞少阳性率不高

huarenqiang5

主要考虑以下几点：1.抗体质量问题；2.细胞密度过低；3.操作上的问题导致。

3 回答259 围观

问Elisa实验结果白板，对照不显色，咋办呀？

huarenqiang5

考虑以下几点原因：1.将终止液当做底物或者酶结合物使用2.洗涤液桶受到污染，有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。

3 回答701 围观

问Elisa实验中，结果空白背景高，一般是什么原因？

huarenqiang5

常见原因如下：1）洗板不干净；2）显色液变质或者试剂过期；3）试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；4）蒸馏水受酶等污染；5）试剂混用；6）培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

3 回答1445 围观

问有没有测甲基化相关酶活性的方法？

huarenqiang5

传统用于检测DNA甲基化酶活性的方法包括高效液相色谱法(HPLC)，聚合酶链反应(PCR)，凝胶电泳，高效毛细管电泳(HPCE)，以及使用同位素标记的s-腺苷甲硫氨酸甲基化检测。替代的DNA甲基化酶活性测定方法，如放射法、比色法、荧光法、电化学法等。

4 回答1578 围观

问dl甘油醛能用pbs溶解吗

huarenqiang5

可以用pbs来溶解dl甘油醛。

3 回答716 围观

问悬浮细胞涂片让染色问题

huarenqiang5

这几种染色方法细胞涂片都不能完全干燥，否则会影响结果。

3 回答879 围观

问请大神帮我看看时长满了还是污染？

huarenqiang5

你这个污染比较严重，建议及时处理一下看看。

3 回答644 围观

问荧光微球标记出现聚集现象求助？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1.缓冲体系PH太低的问题。2.超声不完全，尤其在喷金前，就很容易出现堵膜现象。3.活化剂EDC和NHS的用量、还有活化时间、抗体用量、有没有封闭好也都是有可能会造成堵膜的。4.微径大了，微球浓度过高。

3 回答2089 围观

问求助免疫荧光相关问题？

huarenqiang5

做大鼠血管的免疫荧光检测，取材后一般固定24-48小时。对于血管免疫荧光检测来说石蜡切片相对来说要好点。

3 回答205 围观

问免疫荧光微球的问题？

huarenqiang5

建议做一下电镜或者用粒度仪测一下粒径，到底聚集到什么程度，如果是聚集的验证，那就要在偶联的方案上做改变，比方说EDC的用量，微球的用量，偶联的过程、缓冲体系等，缓冲体系一般用MES和硼酸体系，都可以试下，另外，你跑条时的表面活性剂也要摸索下，这个很关键。还有就是你如果只是药物筛选，完全可以把荧光标记物液态保存，不必喷到样品垫上去，这样也有利于释放。

3 回答684 围观

问检测疫苗免疫效果时，有淋巴细胞分型实验，这个一定要用流式检测吗，看到网上有elisa试剂盒，可以选择吗？

huarenqiang5

检测疫苗免疫效果时，淋巴细胞分型实验，可以用elisa试剂盒。

3 回答374 围观

问检测疫苗的免疫效果一般选择哪些指标？

土井挞克树

可以检测抗体产生速率及有效期。

3 回答533 围观

问免疫荧光是不是必须要有空白对照、阴性对照和同型对照，如果少了一个是不是要再做一次啊？

土井挞克树

不可以只设一种，你提到的都需要对照，缺乏对照的话统计学上误差增加

3 回答936 围观

问霉菌的药敏试验怎么做？

huarenqiang5

可以按以下步骤进行：1、琼脂平板制备按照营养琼脂干粉说明来进行稀释，稀释后琼脂放在微波炉里进行加热，加热后琼脂移至超净工作台中，静置待温度降至50℃（手指能接受的最高温度）左右时，开始倒平板，内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液，倒入后迅速混匀铺满平皿底部。2、药液制备：按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10

3 回答1795 围观

问有没有提原生质体的大佬呀，可不可以帮我看下我这提出来的是不是原生质体呀（材料是木本植物叶片，叶片很小，属于针叶，40倍镜下观察的

sswei

原生质体就是植物细胞除去细胞壁后剩下的部分，该片显示少，建议再多做几张片。

2 回答526 围观

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