实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问在测量多糖中蛋白质含量时，是否可以使用BCA测量，对比使用Bradford法哪种方法更适合，为什么？

loveliufudan

BCA和Bradford法都是常用的蛋白质测量方法，但是它们对多糖的干扰程度不同。通常情况下，多糖会干扰Bradford法的测量，导致高估蛋白质含量。而BCA法对多糖的干扰相对较小，更适合测量多糖中蛋白质的含量。因此，如果需要测量多糖中蛋白质的含量，建议选择BCA法进行测量。但是，如果待测样品中没有多糖的干扰，Bradford法也可以使用。需要根据具体情况选择合适的方法。

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问FITC-CM-Dextran 怎么配

huarenqiang5

7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

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问请问细胞铺96孔板先给药预保护俩小时再加造模剂，最后测细胞活力。这期间给药和造模剂的浓度怎么控制?

huarenqiang5

浓度每一孔250μl。通常每一孔不少于100μl。

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问大分子量蛋白200kDa，在做western blot要注意什么

loveliufudan

在进行 Western blot 实验时，对于大分子量蛋白（如200 kDa）的检测需要特别注意以下几点：蛋白质的迁移：由于大分子量蛋白分子较大，迁移速度较慢。为了充分迁移，需要增加电泳时间、电压或使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度。蛋白质的转移：大分子量蛋白转移至膜上的效率可能较低，因此需要更长的转移时间和更高的电流来促进转移。膜的选择：选择适合大分子量蛋白检测的膜。例如，PVDF（聚偏氟乙烯）膜

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问western blot免疫印迹实验，目的带很弱，要怎么加强

土井挞克树

增强上样浓度和上样量，延长一抗孵育时间

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问毕业论文做的科里一个老师的课题，我做的方案年龄有拓宽，还需要重新过伦理审核吗？

sswei

需要进行伦理资料补充审核。两个老师都写上去。

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问Elisa实验中无法检测出弱阳性质控的样本，是由于什么原因造成的？

loveliufudan

可能有以下几个原因：抗原过少：如果样品中的抗原浓度过低，可能会导致无法检测出弱阳性结果。在这种情况下，可以尝试增加样品的浓度或者使用更敏感的检测方法。洗涤不彻底：洗涤步骤是Elisa实验中非常重要的一个环节，如果洗涤不彻底，可能会导致样本和检测试剂之间的非特异性结合，从而产生高背景信号，影响结果的准确性。建议仔细检查洗涤步骤是否正确执行。抗体浓度不足：如果使用的抗体浓度过低，可能会导致检测的灵敏度

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问热蛋白组学实验，在用液氮冻融裂解hepG2细胞后，BCA定量细胞蛋白浓度过低是什么原因呢？

huarenqiang5

主要考虑：1.可能细胞状态不好；2.蛋白与蛋白间性质差异大；3.BCA反应非线性，测定时可能出现偏差，要精度准确，做标准曲线时的点设置多些；4.试剂BCA，一般最低检测限5ug/ml，灵敏度要达到1ug/ml，必须采取加强法测定，比如样品多加几倍。

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问Wb上样浓度应该选择多少？

balalaLy

应该是看蛋白量吧，一般20ug总蛋白就可以了

3 回答2929 围观

问Western blot 总是出现固定的一条强杂带

balalaLy

有些抗体会出现杂带是正常现象，但是你这个普遍都有而且位置差不多，应该就不是一抗的问题，换一个二抗试试

4 回答604 围观

问最近遇到了小鼠免疫问题

huarenqiang5

主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间，从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。

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问有淋巴细胞做抗原实验

huarenqiang5

免疫同一只小鼠建议用同一品类的血液提取的淋巴细胞。免疫小鼠1.0×10-2.5×10 个脾细胞。

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问酶放大免疫实验技术

huarenqiang5

荧光标记技术：是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。

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问用钙离子浓度检测试剂盒有结果，而且实验组和对照组差异很大，但是做硝酸银染色都是阴性

huarenqiang5

你的这个情况主要考虑可能是操作问题导致，建议重新做对比分析一下。

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问杂交瘤细胞什么时候进行传代？

huarenqiang5

当细胞处于对数生长的中期时，可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。

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问激光共聚焦显微镜与荧光显微镜显示的染色结果为何不同？

huarenqiang5

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领

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问非特异性免疫荧光染色

balalaLy

可以适当延长封闭时间或者提高封闭液的血清浓度

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问荧光免疫组化实验中，和核染对照组超过多少百分比一致才认为目的蛋白是核表达？

huarenqiang5

和核染对照组一般要超过80%时才表示目的蛋白是核表达。

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问ELISA操作咨询各位前辈

sswei

ELISA中加样须注意如下问题：　　1.吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确!　　2.不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确!　正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：　　1.角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确!　　2.吸头应当贴着管壁和液面的

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问wb抗体和elisa抗体有什么不同要求？

sswei

一般来说用于 western 的抗体主要识别氨基酸序列特异性；而可用于 ELISA 的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。做免疫印迹时选择抗体主要应考虑两个问题，一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白，另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。

3 回答1293 围观

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