实验问答

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问96孔板如何确定合适的细胞接种密度和药物干预时间?

loveliufudan

确定适当的细胞接种密度和药物处理时间是细胞实验设计中非常重要的步骤。96孔板可以用来进行高通量筛选实验，其中可以同时测试多个样品以及不同处理条件下的细胞生长情况。以下是一些方法来确定适当的细胞接种密度和药物处理时间：文献调研：在设计实验之前，可以查找类似实验的文献来获取参考信息。通过文献中的描述，可以了解到哪些细胞类型适合在96孔板上进行实验、推荐的接种密度和药物处理时间等信息。实验前的预测试验：

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问大分子量蛋白转移效率低的解决方法

loveliufudan

以下是一些可以尝试的方法来提高大分子量蛋白的转移效率：增加电流：使用更高的电流可以加快蛋白质的转移速度。一般情况下，使用200 mA或更高的电流可以提高转移效率。延长转移时间：由于大分子量蛋白的迁移速度较慢，需要更长的转移时间来完成转移。一般来说，大分子量蛋白的转移时间需要至少1小时或更长时间。使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度：一些缓冲液（如Tris-Glycine）中含有特殊的离子浓度梯度，可以

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问条带立即出现肉眼可见的黄色，但是显影仪器上怎么也拍不出来条带

loveliufudan

如果在显影仪器上无法拍出实验显影内参条带，可能有以下几个原因：显影时间不够长：有时候，即使条带已经显现，但显影时间仍然不够长，导致显影强度不足，无法被显影仪器检测到。建议在检测之前将显影时间适当延长，以确保显影强度充足。显影条件不合适：不同的内参条带可能需要不同的显影条件（例如显影时间、底物浓度等），如果显影条件不合适，则可能无法被显影仪器检测到。建议根据实验要求，对显影条件进行优化和调整。显影仪

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问星形胶质细胞培养交流

loveliufudan

针对这种情况，建议可以采取以下措施：采用低速离心：如果实验需要离心，可以采用低速离心。低速离心可以避免对细胞的机械损伤，同时可以去除杂质和细胞碎片。选择适合的离心管或离心管衬垫：有些离心管或离心管衬垫比较适合星形胶质细胞的离心，可以避免细胞损失。可以向供应商咨询或者尝试不同的离心管或离心管衬垫。

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问免疫荧光实验中，目标蛋白荧光很弱怎么办

loveliufudan

如果在免疫荧光实验中，目标蛋白的荧光很弱，可能有以下几个原因：次生抗体或探针浓度不够：次生抗体或探针是检测目标蛋白的关键试剂，如果浓度不够，可能无法充分与目标蛋白结合，导致荧光信号很弱。建议适当调整试剂的浓度，以确保充分结合和信号强度。特异性抗体质量不佳：特异性抗体质量不佳可能导致与非目标蛋白的结合，或者结合不充分，从而导致荧光信号很弱。建议更换高质量的特异性抗体，或者优化抗体结合条件，以提高信号

3 回答1788 围观

问人和小鼠的中性粒细胞大多是Ly6G，CD11b/c，大鼠的中性粒细胞标志物，文献里很少有，也不统一，流式用什么标记比较好？

loveliufudan

人和小鼠的中性粒细胞表面标志物确实大多是Ly6G和CD116/C。对于大鼠中性粒细胞的表面标志物，虽然文献中不太统一，但是CD11b和Ly6G被广泛认为是大鼠中性粒细胞的标志物。对于流式细胞术的标记选择，通常建议使用多个标记共同检测目标细胞。对于人和小鼠中性粒细胞，常用的标记包括Ly6G、CD11b、CD15、CD16和CD66b等。对于大鼠中性粒细胞，常用的标记包括CD11b、Ly6G、CD45

3 回答9262 围观

问如何通过免疫组化实验来确定某个蛋白质是一个潜在的免疫识别分子？

土井挞克树

可以使用已知抗体去验证未知的免疫识别分子，如果产生了特异性结合，那么可以确定这个蛋白是潜在的免疫识别分子

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问细胞片组织片固定的原理

天一湖医者

固定方法可以分为两类:有机溶剂和交联剂。有机溶剂如甲醇和丙酮等可去除类脂并使细胞脱水,同时将细胞结构蛋白沉淀。交联剂如多聚甲醛通常通过自由氨基酸基团形成分子间桥连,从而产生一种抗原相互连接的网络结构。交联剂比有机溶剂更易于保持细胞的结构,但因为交联阻碍抗体结合,可能会降低一些细胞组分的抗原性,因此需要增加一个通透步骤以使抗体能够进入标本。两种固定方法都可能使蛋白抗原变性,因此使用变性蛋白作为抗原生

3 回答1089 围观

问免疫荧光实验通透剂的选择及原理

天一湖医者

一般用 0.1%皂角苷戒 0.02%的Triton X-100 进行通透。

5 回答2650 围观

问细胞转染了带FLAG的质粒为什么看不到荧光？

天一湖医者

和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.

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问免疫组化中，标本的着色位置不对一般是什么原因造成的？

huarenqiang5

可能原因为：1.固定原因；2.修复过度；3.抗体质量原因；4.一抗浓度过高或实验温度过高、时间过长。

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问免疫组化大家一般实验组纳入多少病例数？

huarenqiang5

免疫组化实验组至少4-6病例数。

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问乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法

土井挞克树

除了化学法，还可以做免疫荧光实验，看抗原的表达强度，来检测阳性的强弱

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问Marker没有完全转上，这是什么原因？！！！有一部分在胶上

天一湖医者

首先排除Marker自身问题.你的Marker是否是点在最边上的泳道? 如果在最边上有可能是你的滤纸比膜小, Marker那里没有闭合导致的. 或者边缘位置的膜和胶没贴紧,有气泡, 所以转不过去. 你把Marker点在中间位置看看情况.

5 回答245 围观

问大鼠处死后，心肝脾肺肾等各器官需要多久内固定才能较好地保存组织结构，求大神解惑~

huarenqiang5

一般固定12至24小时最为合适。

3 回答1895 围观

问脱氧核酶实验是什么实验？

土井挞克树

脱氧核酶实验是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的单链DNA片段，具有高效的催化活性和结构识别能力，进行未知识别的实验方法。在恶性肿瘤的研究方面有巨大前景

3 回答464 围观

问请问，组化拍片，DAB颜色很深，不明亮，像树皮的颜色。我的DAB是5s左右就放入PBS洗了，不知道为什么会这样。

sswei

显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间。

4 回答302 围观

问请问悬浮细胞（例如真菌的原生质体）应该怎么保持固定不被pbs冲洗掉？

huarenqiang5

采用多聚甲醛固定法进行固定：A.PBS 配制 4% 多聚甲醛。B. 用 PBS 洗涤细胞 2 次，200 g 离心 5 分钟；重悬细胞。C. 用 4% 多聚甲醛溶液悬浮细胞，细胞浓度约为 1x106/ml，室温下静置 15 分钟, 不时摇动。D. 200 g 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，重复洗涤细胞 2 次；E. 用含 0.2% TritonX-100 或 NP-40 的 PBS 溶液透

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问ELISA实验中，怎样选择最佳的包被抗原浓度以获得最高的灵敏度和特异性？

龙大人驾到

1. 初始的抗原包被浓度可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列抗原包被浓度的实验，产生一组数据，以评估不同浓度下的ELISA信号，并确定最佳浓度。3. 可以通过稀释抗原溶液来获得不同的抗原包被浓度。例如，对于包含1mg/ml抗原的溶液，可以通过将其与缓冲液按比例混合并逐步稀释到0.1mg/ml、0.01mg/ml等浓度。4. 对于每种稀释物，与一定数量的特异性抗体进行结合。结合后，可

4 回答2988 围观

问病毒中和实验中，如何确定最佳的病毒和细胞比例以获得最高的病毒中和效果？

龙大人驾到

1. 初始的病毒和细胞比例可以根据文献或前人经验进行初步选择。2. 进行一系列病毒和细胞比例的实验，产生一组数据，以评估不同比例下的中和效果，并确定最佳比例。3. 可以通过稀释病毒溶液来获得不同的病毒浓度。例如，对于包含106个病毒的溶液，可以通过将其与相应量的培养基混合并逐步稀释到10-6的浓度。4. 对于每种稀释物，与一定数量的细胞进行接种。接种后，可以根据实验需要和方法使用不同的检测方法（例

3 回答625 围观

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