实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问连接转化菌落验证时，挑单菌落➕10ul水，然后以此为模板跑PCR的话，会不会没挑到跑出来是空的呀，尤其是还想跑温度梯度的

申东熙老伯

挑大一点的单菌落，挑了之后放在培养基里，摇床摇几个小时再做PCR鉴定。跑温度梯度一般是跑的出来的。

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问磁珠分选和流式分选中对细胞的处理过程有什么不同？

土井挞克树

流式分选需要先制备单细胞悬液，然后染色才能进行分选

4 回答299 围观

问FIIC标记的抗原如何用于抗体的流式分选？

土井挞克树

可以通过做同型对照，然后间接标记法进行FIIC抗原的流式分选

3 回答232 围观

问抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价，OD值要如何进行分析？

sswei

OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。最需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时

2 回答2047 围观

问我要给小鼠灌胃一种中药，可是该中药并不溶于水，该怎么使其溶解度增加呢

huarenqiang5

不溶的话建议使用针管打进去就可以了。

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问人PBMC中B细胞的流式分选

huarenqiang5

步骤如下：1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理。2、按血：分离液＝1：2注入淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟。3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次。4、获得细胞可做分选或其他实验。建议：1、实验中用肝素方法抗凝，效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。推荐使用ACD抗凝剂，效果very good

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问准备做edu，荧光结果该怎么分析啊，

土井挞克树

可以通过edu荧光的表达来看细胞的增殖结果。

3 回答7752 围观

问测量2-羟基对苯二甲酸荧光发射光谱，激发波长310nm，发射波长425nm可以用玻璃比色皿吗

huarenqiang5

利用荧光分光光度法测定2-羟基对苯二甲酸在425nm处的荧光强度,可以用玻璃比色皿。

4 回答782 围观

问测定小鼠cTnT、LDH 、 CK-MB和BNP，是需要血清还是心脏组织

huarenqiang5

测定小鼠cTnT、LDH、CK-MB和BN P一般选用血清进行测定。

4 回答833 围观

问豚鼠皮肤免疫组化，为什么会出现黑渣子

huarenqiang5

考虑存在支原体或其他细菌污染了，建议及时处理。

4 回答491 围观

问想问问有没有大神可以指点一下，我的小鼠造模半天内就出现死亡并且眼睛上有白点的现象，这是怎么造成的，该怎么处理提高小鼠造模成功率?

huarenqiang5

从以下几个方面来提高造模成功率：（1）挑选合适线栓，满足一下几点要求：线栓不可过硬。过硬线栓容易找手感，但是容易出现刺破蛛网膜下腔血管，导致颅内出血。同时过硬线栓还会改变血管自然形态，当线栓插入血管以后，因为线栓过硬，血管肌张力无法使得线栓改变形态，只能被线栓改变形态，导致血管处于紧绷状态，对于再灌注操作不利。选择硅胶头尽可能接近圆柱形的线栓，这样当线栓进入MCA外后，能够完全堵塞MCA，而不会出

3 回答576 围观

问大分子片段构建载体总是不成功

huarenqiang5

考虑以下问题：（1）buffer和酶切效率。同样受到内切酶的活力及buffer影响，值得注意的是不同厂家的内切酶一般匹配不同的buffer，所以在设计酶切引物时就应该优先核对buffer问题，同一厂家使用同一种buffer的两种酶酶切时可以同时加入两种酶进行酶切，节省实验时间，同时酶切效率会有所提高。（2）内切酶受到甲基化等因素影响一些限制性内切酶的酶切效率受到甲基化的影响，如MluI受GC甲基化

5 回答687 围观

问大鼠牙周缺损模型如何控制缺损大小？

huarenqiang5

按以下几点建议进行可以很好的控制缺损大小：建议在牙科显微镜下操作,可以精确地控制缺损大小,在后期实验中可以做到制备定量缺损。上颌第一磨牙近中根长度大约 4~5 mm,在做缺损前要注意不应过度磨损,以免与上颌窦穿通。用16cm血管钳撑开大鼠口腔,碘酚对上颌磨牙及近中黏膜区进行表面消毒,沿着大鼠上颌第一磨牙近中端部位用刀片割开3mm左右，上下颌完全分开,

3 回答817 围观

问求大神看看这是怎么回事呢？

balalaLy

这是冰冻切片没有处理好出现的组织破碎了

3 回答479 围观

问免疫原性细胞死亡标志物HMGB1检测

sswei

可能存在有样品纯度低或操作时失误等情况。

3 回答971 围观

问邻苯二甲醛法测定胆固醇含量时，为什么要调节PH值为2和7呢？

sswei

根据胆固醇在不同pH值上吸收峰值不一样来进行计箅。

3 回答1045 围观

问想问一下大佬们，我要测一个放线菌的分泌蛋白的表达量，

sswei

可以采用散射比浊法来测定分泌蛋白的量。

3 回答468 围观

问SH-SY5Y 复苏第一天正常吗

sswei

继续进行复苏，严密观察细胞形态及数量等，出现异常及时处理。

3 回答393 围观

问为什么只能在10微米以上情况下使用 Triton-X100？

sswei

Triton X-100是非离子型表面活性剂，在4%多聚甲醛固定过程中起着增加细胞膜通透性的作用！是一种比较温和的去垢剂(表面活性剂或称界面活性剂)，该产品经常被用于水中帮助分解蛋白酶；但是，必须使用尽可能低的浓度否则会污染样品。高浓度可以裂解细胞,而低浓度可以增加细胞膜的通透性。Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）能够溶解细胞脂质，他可以增加细胞膜对抗体的通透性。在免疫细胞化学中，T

3 回答1191 围观

问急急急！Taqman Pcr为什么会出现这种结果？

sswei

通道数量少，基线水平高，报告难以出。

2 回答342 围观

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