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为什么视野中细胞与细胞之间存在散在的发光点?
土井挞克树
那是非特异性结合产生的背景荧光。属于干扰
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问
qPCR加样方法小技巧
sswei
加样操作方法,以便更好的开展工作。使用流程:拧到需要的量程,装上枪头,然后手握住枪柄,大拇指按住上面的按钮至第一档位,枪头插入试剂液面下,轻轻松开拇指按钮,移出试剂,把枪头插入要加入试剂的管子,拇指按下枪头,为了把枪头里面的试剂残留都打出去,拇指要用力按至第二档位。用过的枪头如果不用了,可以用拇指按住枪顶端的另一个按钮,把枪头打掉,落到废液缸里。 1、加样前,一定要检查吸头是否上紧,以免液体
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问
基础医学科研小白如何写实验设计呀?
sswei
实验设计的最重要的三个要素是研究目的、研究假设和研究方法。这三个要素决定了研究的成果,是完成科学研究的基础。实验设计总共有四个基本原则 ,它们分别是:1、对照原则 ;2、实验条件一致性原则;3、随机化原则;4、重复性原则。实验设计的基本方法一、明确实验目的 实验目的是实验设计的出发点,要明确对象、范围和研究目的。二、作出假设(实验目的的具体化) 假设是实验设计的关键步骤,实验设计就是要根据假设去寻
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问
免疫沉淀实验,电泳后考染/银染,BSA粉末是否有背景干扰
土井挞克树
会有背景干扰,粉末有时候溶解不足就会产生背景干扰
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问
求助最近要做细胞免疫荧光
土井挞克树
如何可以使用质粒转染或者也可以进行胞吞入核,比较难,需要多练习
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问
检测疫苗免疫效果时,有文献会做淋巴细胞增殖实验,请问是用脾细胞做效果好还是用外周血的细胞效果好?
huarenqiang5
淋巴细胞增殖实验用外周血的细胞来做相对来说效果要好。
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问
RNA中有DNA污染的处理方式有哪些
huarenqiang5
彻底去除基因组 DNA 最为可靠的方法是采用 DNase I消化。 DNase On Column Kit 可配合 HiPure RNA抽提试剂盒一起使用。组织/细胞样品经裂解液裂解后,转移至 HiPure RNA Column吸附 RNA,加入 DNase至柱子的滤膜中消化去除 DNA,然后加入洗涤液洗涤去除 DNase 和降解的 DNA。 1
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问
克隆PCR产物的最优条件是什么?
huarenqiang5
插入最佳片段后室温保温1h,或4℃过夜。在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑。室温保温1h能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜。
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问
原代细胞培养贴壁性差如何改进?
sswei
大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h,细胞不贴壁有好多种原因的:1、如果你用玻璃培养瓶培养的话,有可能你的瓶子没处理好;建议你用一次性培养瓶,进口的都可以。2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化,消化的程度要掌握好,如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化,就是放在37度里消化,时间比较短不好控制,传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里,一般在几个小时以上,胰酶浓度也有要求的,一般都
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问
GM-DC诱导失败无数次,求大神指点
huarenqiang5
建议开始用不含GM-CSF培养至少3小时至几十小时后再加GM-CSF进行。
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问
做PE通道的正选细胞少阳性率不高
huarenqiang5
主要考虑以下几点:1.抗体质量问题;2.细胞密度过低;3.操作上的问题导致。
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问
Elisa实验结果白板,对照不显色,咋办呀?
huarenqiang5
考虑以下几点原因:1.将终止液当做底物或者酶结合物使用2.洗涤液桶受到污染,有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。
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问
Elisa实验中,结果空白背景高,一般是什么原因?
huarenqiang5
常见原因如下:1)洗板不干净;2)显色液变质或者试剂过期;3)试剂稀释有误,如加酶的浓度过高;4)蒸馏水受酶等污染;5)试剂混用;6)培养箱温度超过37℃或反应时间过长。
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问
dl甘油醛能用pbs溶解吗
huarenqiang5
可以用pbs来溶解dl甘油醛。
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问
免疫印迹实验所有条带连成片
dxy_5kz0zll2
原因最可能是样品量上的太多,其次是电泳长时间停止样品弥散。
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问
目的基因260bp左右,导入19t载体 用M13引物做菌落PCR鉴定,产物应该多大?谢谢
sswei
如果模板序列已知的话,直接将引物序列和模板进行匹配,两条引物之间的DNA片段长度即为目的PCR产物的大小;如果想知道PCR仪反应后的产物大小,可以跑琼脂糖凝聚电泳,照胶仪下根据Marker的指示条带读取产物的大小,或者可以用照胶仪自带的软件直接读出所有pcr产物条带的大小。
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问
四因素三水平正交实验。
sswei
不合理,需要对整个实验重新进行。
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问
霉菌的药敏试验怎么做?
huarenqiang5
可以按以下步骤进行:1、琼脂平板制备按照营养琼脂干粉说明来进行稀释,稀释后琼脂放在微波炉里进行加热,加热后琼脂移至超净工作台中,静置待温度降至50℃(手指能接受的最高温度)左右时,开始倒平板,内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液,倒入后迅速混匀铺满平皿底部。2、药液制备:按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10
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问
有没有提原生质体的大佬呀,可不可以帮我看下我这提出来的是不是原生质体呀(材料是木本植物叶片,叶片很小,属于针叶,40倍镜下观察的
sswei
原生质体就是植物细胞除去细胞壁后剩下的部分,该片显示少,建议再多做几张片。
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问
动物组织qpcr跑不出来
dxy_c430nxh5
可以排除仪器,操作,试剂的问题那就是实验设计的问题了,你前后换了组织,该组织里面可能不含有你想要的目的基因,内参基因能出来是正常的,因为它存在所有的组织里面,但是你得目的基因不一定存在你后面的组织里面
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