实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问连接转化菌落验证时，挑单菌落➕10ul水，然后以此为模板跑PCR的话，会不会没挑到跑出来是空的呀，尤其是还想跑温度梯度的

申东熙老伯

挑大一点的单菌落，挑了之后放在培养基里，摇床摇几个小时再做PCR鉴定。跑温度梯度一般是跑的出来的。

3 回答499 围观

问磁珠分选和流式分选中对细胞的处理过程有什么不同？

土井挞克树

流式分选需要先制备单细胞悬液，然后染色才能进行分选

4 回答270 围观

问FIIC标记的抗原如何用于抗体的流式分选？

土井挞克树

可以通过做同型对照，然后间接标记法进行FIIC抗原的流式分选

3 回答215 围观

问抗原包板的ELISA用于检测血样中抗体效价，OD值要如何进行分析？

sswei

OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。实验中也是利用“OD值”和被检测物的浓度之间的关系来根据吸光度。最需要注意的就是测量时的光波长。上文在介绍“OD值”概念时

2 回答1928 围观

问准备做edu，荧光结果该怎么分析啊，

土井挞克树

可以通过edu荧光的表达来看细胞的增殖结果。

3 回答7457 围观

问豚鼠皮肤免疫组化，为什么会出现黑渣子

huarenqiang5

考虑存在支原体或其他细菌污染了，建议及时处理。

4 回答432 围观

问求大神看看这是怎么回事呢？

balalaLy

这是冰冻切片没有处理好出现的组织破碎了

3 回答438 围观

问为什么磁珠优先吸附大片段而不是小片段？为什么磁珠表面带负电还可以吸附DNA？

huarenqiang5

磁珠会优先吸附大片段DNA，是因为在一定浓度的PEG和盐离子体系中，片段更长的DNA会因失水暴露更多的磷酸基团，然后在盐离子如钠离子的作用下，优先与磁珠结合，而更小的DNA片段则不结合。

3 回答1418 围观

问相同粒径的磁珠，是否提取DNA的能力就一样了？

huarenqiang5

相同粒径的磁珠提取DNA的能力不相同。

4 回答423 围观

问封片的时候是周边点上封片液，还是点到中间，永久封片怎么弄？

huarenqiang5

封片的时候只需要在中间点封片液。永久装片的封片方法，包括以下步骤： 1.封片胶包裹标本：将标本置于封片胶中，使标本与封片胶充分接触，在封片胶中缓慢拖动标本至标本周围无小气泡为止，取出标本，得到包裹有封片胶的标本；将包裹有封片胶的标本转移至盖玻片上，得到带有标本的盖玻片； 2.载玻片滴封片胶：在载玻片上滴加封片胶，得到带有封片胶的载玻

4 回答1995 围观

问转录组数据中的CDS序列可以用于设计引物吗

huarenqiang5

转录组数据中的CDS序列能够用于设计引物。

5 回答1652 围观

问免疫原性细胞死亡标志物HMGB1检测

sswei

可能存在有样品纯度低或操作时失误等情况。

3 回答938 围观

问免疫磁珠分选与其他分选技术（如流式细胞术）相比有何优缺点？

huarenqiang5

流式分选一般都是电荷式分选，即对感兴趣的目标细胞所在的液滴充上电荷，液滴经过电极板，通过电场作用发生偏转，从而实现分选。磁珠分选首先使用磁珠偶联的抗体去标记细胞，然后把标记好的细胞过柱子，带磁珠的细胞就留在柱子上，不带磁珠的细胞就流走了，从而实现分选。不同点： 1、对细胞的刺激。磁珠分选最

4 回答830 围观

问邻苯二甲醛法测定胆固醇含量时，为什么要调节PH值为2和7呢？

sswei

根据胆固醇在不同pH值上吸收峰值不一样来进行计箅。

3 回答1007 围观

问如何收集不同类型的样本并避免样本的衰竭？在采集血液样本时，应该如何处理血液样本以保持样本的完整性？

huarenqiang5

1.全血采集全血样品后，装入含适当抗凝剂的容器内防止凝集。血液采集后要尽快与抗凝剂混合，但一定要注意摇动手法应轻柔。剧烈晃动可造成溶血，导致红细胞内的化学物质释放入血浆，从而影响分析结果的准确性。2.血浆血浆样品制备：最好在采样后1 h内离心，如果无条件达到，应使用肝素抗凝后冷藏保存。若冷冻过夜，检测前需要再次离心。①采集血液样本，置于含有适量抗凝剂的试管内②缓慢摇动试管，混匀

3 回答514 围观

问想问一下大佬们，我要测一个放线菌的分泌蛋白的表达量，

sswei

可以采用散射比浊法来测定分泌蛋白的量。

3 回答444 围观

问基因工程疫苗的制备需要注意哪些问题？

土井挞克树

需要注意，载体与表达系统既要能够高效表达外源基因，又要保证基因工程疫苗的安全性

3 回答461 围观

问SH-SY5Y 复苏第一天正常吗

sswei

继续进行复苏，严密观察细胞形态及数量等，出现异常及时处理。

3 回答373 围观

问为什么只能在10微米以上情况下使用 Triton-X100？

sswei

Triton X-100是非离子型表面活性剂，在4%多聚甲醛固定过程中起着增加细胞膜通透性的作用！是一种比较温和的去垢剂(表面活性剂或称界面活性剂)，该产品经常被用于水中帮助分解蛋白酶；但是，必须使用尽可能低的浓度否则会污染样品。高浓度可以裂解细胞,而低浓度可以增加细胞膜的通透性。Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）能够溶解细胞脂质，他可以增加细胞膜对抗体的通透性。在免疫细胞化学中，T

3 回答1016 围观

问急急急！Taqman Pcr为什么会出现这种结果？

sswei

通道数量少，基线水平高，报告难以出。

2 回答326 围观

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