实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问实时荧光定量PCR为什么模板浓度高了反而CT值增大了？

土井挞克树

可能是扩增效率低的原因，提高扩增效率

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问标尺到底是什么意思？加标尺的标准是什么?如果没有一张加好标尺的标准图片，那我的图片该怎么加标尺呢？

土井挞克树

标尺是一个参考，可以直观的提供样本的计量数据

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问abcam的抗体说明书上观察到的分子量是33，我跑的都在42，文献里别人用sigma或者其他抗体条带也在42，我跑的能不能用啊？呢

loveliufudan

抗体说明书中提到的分子量是供参考的，它是由厂家或供应商提供的建议值，可能会因为生产批次或其他因素而略有不同。因此，在实验中，您应该以您的实验结果为准，而不是仅依赖于说明书提供的参考值。在您的实验中，您得到的蛋白质大小为42 kDa，而在其他人的实验中，他们使用的抗体或其他试剂得到的蛋白质大小也为42 kDa。这表明您的实验结果与其他人的实验结果一致，并且与文献报道的结果相符合。因此，您可以使用您的

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问请问牙龈卟啉单胞菌的浓度与od值关系？

sswei

一般OD600=1时对应的细菌浓度为undefined10^9cfu/ml。

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问血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限及样本前处理的具体操作？

loveliufudan

关于血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限和样本前处理的具体操作，具体如下：最低检测限最低检测限可以因实验所使用的qPCR反应体系、检测靶标和实验条件而异。通常来说，为了获得更高的灵敏度和特异性，建议使用高纯度的核酸提取方法和qPCR试剂盒，以及进行多次重复检测。一些文献报道了在使用血清替代物时检测支原体的最低检测限为10^3到10^4个基因拷贝数/毫升。样本前处理在使用血清替代物处理样本前

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问分子克隆测序都是载体的的序列？

土井挞克树

说明载体没连接或者载体脱离了，需要重新连接

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问关于Raw263.7巨噬细胞极化问题，加LPS后，如何判断诱导其向M1型极化成功了呢？

土井挞克树

需要加细胞因子，然后观察m1分泌蛋白的分泌情况判断

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问组织芯片做多重免疫荧光如何避免组织脱离?

土井挞克树

脱蜡前进行水化，可以防止组织脱离

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问多重免疫荧光为什么会飞片?

loveliufudan

造成多重免疫荧光飞片的原因有以下几个方面：治疗组织不当：在制备组织样本时，固定和处理组织的方法和条件可能会影响组织的完整性。如果组织未能充分固定或处理不当，组织结构会受到破坏，导致组织容易脱落。贴片不当：在贴片时，如果载玻片上的组织样本未能均匀涂布或压实，样本就会容易脱落。此外，如果载玻片表面存在污染或未经适当处理，组织样本的附着力也会受到影响。洗涤和染色条件不当：在染色和洗涤过程中，如果使用过于

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问用transwell对巨噬细胞和肺成纤维细胞共培养？

sswei

实验步骤:1、效应细胞接种到transwell小室中，培养24小时。2、靶细胞接种到细胞培养板中，培养24小时。3、过夜培养后，将transwell小室和培养板中的培养液除去，下室加入新的培养液。4、将transwell小室放入细胞培养板中并加入新的培养液，培养48-72小时后进行检测。5、取出transwell小室，吸出细胞培养板中的培养液。6、PBS洗涤细胞培养板两次，4%多聚甲醛固定细胞。7

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问关于荧光定量PCR的Ct值的

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：(1)反应的循环数不够：一般要在35个循环以上，但是过多的循环次数可增加背景值。(2)检测荧光信号的步骤有误：SYB-Rgreen法（SG法）采用的是72延伸时采集荧光信号，Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性，若是电泳条带呈弥散状，可考虑重新合成引物或探针。(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释

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问病毒与含有抗体的血清孵育后病毒浓度增高是为什么？

sswei

该病毒抗体的对病毒效力低下或无效，可能抗体失效或抗体效力减弱。

3 回答280 围观

问正常C57小鼠的子宫重量是多少呢?

huarenqiang5

5周龄约重10-20mg，10周龄的约重23-30mg。

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问免疫组化标本突然大量脱片

沫子大大

大量脱片问题考虑你的试剂浓度是否合适，同时你的载玻片有没有问题，普通的载玻片需要度明胶，也可以直接买黏附性的载玻片，贴的时候不要弄反。

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问薄膜水化法制备聚合物囊泡，在水化过程有絮状物析出，有什么解决办法吗？

sswei

生成成沉淀原因大约是因为甲醛与聚乙烯醇发生分子间的缩醛反应，使原本线性的聚乙烯醇变成T型交联，分子量变大而沉淀出来，而缩醛，办缩醛的反应是可逆的，并不稳定。只有相邻的两个羟基与甲醛形成的五元环状缩醛才稳定，而这样的产物是线性的，加上众多的羟基，醚键都是亲水基，溶水性好。因此，析出的沉淀会逐渐解去不稳定的T型交联，变成线性的，相邻五元环的可溶性聚合物，又会溶解。

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问请问在免疫组化中，如何避免或减少内源性过氧化物酶或生物素造成的非特异性染色？

晴空a

将切片移入湿盒中加入新鲜配制的3%双氧水，以去除内源性过氧化物酶封闭液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。

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问免疫荧光实验，ubiquitin 显现不是很明显，是什么原因呢？

dxyc42u

与抗体孵育时间有很大关系，可以尝试晚点看荧光

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问如何使用细胞回收液从基质胶上提取细胞

土井挞克树

把细胞回收液收取后先分离纯化后再放到基质胶提取。

3 回答2530 围观

问说明书上说一抗孵育可以是37度2小时，也可以采用4度过夜，那我到底应该采用哪种方法呢？

沫子大大

其实这两种方案我都试过，差异性不是很大。但我染的是小胶质细胞，你的具体情况不了解，你可以根据你的时间安排，算是当做摸条件，但结果差异性应该不是很大。

4 回答2522 围观

问求助：丽春红染色结果一片红没有条带

松鼠的果仁

背景太红了，在去离子水里涮几下

4 回答2062 围观

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