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        【求助】3t3成脂诱导

        相关实验:四环素控制系统诱导基因表达实验

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        此用户已注销

        最近在做3t3的诱导成脂,7天之后上清就黄了,是正常现象么?细胞形态也在改变,或许有人在成脂诱导么?能分享细胞的照片么

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        3 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        培养注意事项:

        1.培养密度一般控制在40-60%的汇合度,过高的汇合度,细胞可能会开始分化;

        2.注意血清类型。一般使用的是新生牛血清培养,用胎牛血清生长速度会加快 ,容易使细胞分化;

        3.传代时铺板需均匀,不然会导致分化不均匀,分化比例低。

        4.从添加诱导剂开始到分化结束,通常需要8天。一般第6天脂滴就出来了,剩下2天就是脂滴积聚的过程。分化效果好的话,第4天脂滴就出来了;

        5.3T3-L1细胞添加诱导剂时,手法要特别轻,尽量用枪头贴壁逐滴加入,让液体慢慢流下,这样对细胞的冲击最小,否则极容易造成细胞卷边飘起;

        6.细胞代数越多,成脂能力越弱,需要诱导的时间也就越长,可适当增加地塞米松和胰岛素用量;

        7. 实验中所使用的溶剂遵循现用现配的原则。

        诱导分化过程:

        1.细胞长满以后,接触抑制2天(目的是让细胞退出生长周期);

        图片描述

        图1. 细胞接触抑制

        2.加入含有IBMX(使用浓度为0.5mM)、地塞米松(使用浓度为1μmol/L)、胰岛素(使用浓度为1-10μg/mL)的培养液培养2天;

        图片描述


        图2. 加诱导培养基1培养

        3.再换成只含胰岛素的培养基培养2天;

        图片描述


        图3. 加诱导培养基2培养

        4.最后换成不含诱导激素的常规培养基培养,每2天换液1次;

        图片描述


        图4. 常规培养

        5.用油红O染色法鉴定细胞是否诱导成功。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这种情况可能是细胞进行脂肪酸合成和沉积的正常现象之一。通常,当脂肪合成和沉积增加时,培养液中的脂溶性色素含量也会增加,导致上清变黄。

        此外,3T3细胞是常用的成纤维细胞系,也可用于诱导成脂实验。在进行成脂诱导期间,3T3细胞的形态通常会发生变化,呈现出圆润、膨胀的外观,同时也会出现脂滴的积累。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        7天左右是会变黄的,是脂肪的颜色

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