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实验问答

23,164,623 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问间接免疫荧光

土井挞克树

考虑非特异性染色的原因，建议更换抗体

3 回答542 围观

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问F11神经元细胞培养

土井挞克树

考虑黑胶虫污染，建议消毒灭菌。

3 回答398 围观

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问Western

loveliufudan

Western blot分析中出现背景干扰和非特异性条带通常是由以下几个原因引起的：细胞裂解不充分：如果没有彻底裂解细胞，残留的细胞组分可能会与检测目标交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。靶蛋白含量过低：如果目标蛋白含量太低，可能无法被充分检测到，从而导致非特异性条带和背景信号增强。抗体特异性不佳：如果使用的抗体与非特异性结构类似的蛋白结合，可能会引起交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强

4 回答406 围观

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问VX2冻存的组织移植问题

loveliufudan

对于VX2移植瘤种植到兔的后腿上后，其生长速度可能会因为多种因素而有所不同，例如移植物大小、兔子的生理状态、实验条件等。一般情况下，VX2移植瘤的生长速度可以在种植后的1-2周内明显加速，但具体的生长速度取决于多种因素。一周后，VX2移植瘤通常会形成明显的肿块，但具体大小会因为以上提到的因素而有所不同。如果需要对瘤体大小进行精确测量，可以使用肿瘤体积的方法，即测量瘤体的三个直径（长、宽、高），然后

3 回答342 围观

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问大鼠尾静脉取血检测胰岛素

loveliufudan

进行大鼠尾静脉取血检测胰岛素时，一般需要抽取一定量的血液才能进行检测。通常，抽取的血液量应该是大鼠体重的1%-3%，也就是说，对于体重为200-300g的大鼠，每次取血量应该在2-6mL之间。需要注意的是，在进行尾静脉取血时，应该采取正确的操作步骤和方法，以避免对大鼠造成不必要的伤害。同时，也应该注意血样采集的时间，以避免影响胰岛素的测定结果。在进行胰岛素的ELISA检测时，需要使用专门的胰岛素试

3 回答1091 围观

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问WB的上样浓度

loveliufudan

一般来说，上样浓度应该根据样品浓度、希望检测的蛋白质浓度和电泳系统的灵敏度来确定。上样浓度过高会导致样品堆积和条带模糊，而上样浓度过低会导致信号弱。通常情况下，建议将上样浓度设置在1-4之间。在优化实验时，可以使用不同的上样浓度进行试验，并比较结果，选择最佳的上样浓度。此外，还可以尝试调整其他实验条件，例如运行时间、电泳缓冲液pH值、电压等，以获得最佳的结果。

4 回答997 围观

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问Dkk1

sswei

DKK1是Wnt/β－catenin信号通路的可溶性抑制剂，它在骨骼发育和骨代谢的过程中都发挥着至关重要的作用。

3 回答359 围观

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问泛素化酶

loveliufudan

确定泛素化的底物靶蛋白后，找到对应的 E1、E2 和 E3 酶通常需要进行以下步骤：文献调研：首先，需要通过查阅相关的文献资料，了解泛素化底物靶蛋白的泛素化机制。文献中通常会提到用于底物靶蛋白泛素化的 E1、E2 和 E3 酶。数据库搜索：在确定了 E1、E2 和 E3 酶的可能性后，可以利用生物信息学数据库如UniProt、NCBI等进行搜索，查找这些蛋白质的基本信息、功能描述和相互作用网络等。

3 回答448 围观

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问多克隆抗体制备，免疫兔子

loveliufudan

通常情况下，不建议直接将含有高浓度尿素的蛋白用于动物免疫免疫，因为高浓度尿素会对动物产生毒性影响，可能会导致免疫反应异常或不良反应。同时，尿素也可能与蛋白质结合，影响蛋白的二级、三级结构和免疫原性。为了克服这些问题，可以采用以下两种方法：尝试将蛋白在含有较低浓度尿素的缓冲液中进行重折叠和重组，以使其回复到天然构象并增强免疫原性。在纯化过程中，可以逐渐降低尿素浓度，并将其转移到合适的缓冲液中，最终得

2 回答1235 围观

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问荧光信号问题

loveliufudan

在核酸检测中，实验组加入了DNA模板，而空白组中只有用水代替模板，因此实验组应该会有更多的靶分子（模板）可供引物探针与之匹配，从而发生聚合酶链式反应 (PCR)。这会导致实验组反应体系中产生更多的荧光信号，因为PCR产物与探针发生结合后荧光染料被激活，发出荧光信号。相比之下，空白组中没有模板的存在，PCR反应几乎不会发生，因此会产生很少的荧光信号。此外，空白组中可能会存在背景噪音或杂质信号，但这些

2 回答207 围观

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问竞争法胶体金，不消线

土井挞克树

不消线可能是因为过量的蛋白可能会封闭某些结合位点，建议换用其他的封闭方式，作对比试验

2 回答1161 围观

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问肿瘤干细胞传代

loveliufudan

传代和扩培肿瘤球（tumor spheres）的方法可以因实验目的、肿瘤类型和细胞培养条件等而异，但以下是一般的操作步骤：用PBS或无酶胰消化液将肿瘤球收集起来，放到50 ml离心管中，然后离心洗涤2-3次，去除细胞碎片和培养基残留物。将肿瘤球重悬于新的培养基（如肿瘤球培养基、serum-free medium等），一般是将每个肿瘤球接种到新的96孔或24孔培养板中。等待肿瘤球重新附着和生长。通常

2 回答525 围观

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问SMD1168和GS115感受态从-80拿出来在冰上化了半个小时，怎么看是否

loveliufudan

在半个小时的冰上解冻之后，如果上层已经稍微澄清，这可能意味着感受态已经成功地被解开。但是，如果下层仍然是白色浑浊的，这可能意味着它们还没有完全解开。在这种情况下，您可以轻轻地摇晃样品管，以帮助混合液体并促进解开。如果您想进一步确认细胞悬液是否已经成功地解开成为可测量的液态状态，您可以尝试进行进一步的实验，例如使用比色法或荧光检测法检测其蛋白质含量或活性等指标。

3 回答457 围观

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问【请教】双抗夹心层析，阴性阳性区分不开

土井挞克树

考虑是包被的问题，夹心包被的程度不够所以分不开

2 回答465 围观

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问求胶原蛋白免疫荧光染色方法

土井挞克树

胶原蛋白免疫荧光染色方法：1.天青石蓝液的配制：天青石蓝（Celestin blue B） 1.25g　硫酸铁铵（ferric ammonium sulfate）1.25g蒸馏水 200ml甘油（glycerin） 30ml将前两者溶于蒸馏水中，然后煮沸，冷却后过滤，再加入甘油和麝香草酚。Mayer氏苏木素的配制苏木素 0.1g　蒸馏水 100ml钾明矾（Potassium alum） 5g柠檬酸

2 回答952 围观

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问胶体金产品出现断点是什么情况

loveliufudan

断点是胶体金产品中常见的问题，可能是由多种因素引起的。以下是一些可能导致断点的因素：pH值：胶体金的稳定性受pH值影响较大，如果pH值偏高或偏低可能会导致断点。请确保使用的缓冲液的pH值适合胶体金产品的稳定性。盐浓度：高盐浓度会影响胶体金的稳定性，导致断点。请确保使用的缓冲液的盐浓度适合胶体金产品的稳定性。温度：胶体金对温度敏感，高温可能导致胶体金的稳定性下降，导致断点。请确保使用的试剂在适当的温

2 回答609 围观

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问四条染色体平衡易位是不是很罕见，还有什么办法吗，三代是不是可能性也不大？

sswei

复杂易位指三条或者三条以上染色体发生断裂，断裂染色体断片发生易位和重接，从而形成多条衍生染色体即染色体易位。很罕见。这种情况本人一般没有异常的疾病表现，但会导致不孕不育，这种核型的人产生的大部分生殖细胞都是有染色体异常的，一般无法怀孕或者怀孕了也会流产，就算生了孩子大概率也是有一些异常的，比如发育迟缓和智力障碍等。但也不是完全没有希望，只是希望很小。可以三代试管婴儿尝试一下，找一个染色体正常的胚胎

3 回答430 围观

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问免疫吞噬实验观察不到鸡红细胞

土井挞克树

把样本浓缩后再观察，你现在样本太稀了

3 回答1013 围观

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问circbase ID转换

loveliufudan

可以使用以下方法：在circBase网站中使用“search by gene symbol”选项，输入GEO2R分析中的基因D，然后检索与该基因D相关的circRNA。在circBase网站的“search”页面中使用circRNA的基因名称进行搜索，并查找与GEO2R分析中得到的基因D相关的circRNA。如果以上两种方法都不起作用，可以使用BLAST（基于序列相似性的搜索工具）来搜索与GEO2

3 回答879 围观

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问求助请问癌细胞分裂期有多长时间啊？0.5-2h？

loveliufudan

癌细胞分裂期的时间可以因细胞类型和生长条件而异。一般来说，癌细胞的有丝分裂周期约为 18-24 小时，其中 G2/M 期为 4-6 小时，M 期为 1-2 小时。对于您所做的 H1299 细胞，nocodazole 可以阻止细胞有丝分裂，使大部分细胞停滞在 G2/M 期。如果您想要得到分裂期的细胞，您可以在 nocodazole 处理后等待 1-2 小时，这样细胞应该已经进入 M 期。接着您可以用

3 回答1010 围观

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