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        做重组蛋白,构建质粒(无his-tag)

        相关实验:质粒构建技术

        user-title

        idiotOC0P

        构建质粒的时候,插入目的基因的时候没有插入his-tag就加终止子了。能通过合成基因的方式外加his-tag吗。

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        3 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        通过设计引物,添加his-tag,克隆到质粒中去。

        user-title

        idiotOC0Puser-title

        已经有终止子也可以吗

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在构建质粒时,如果没有在目的基因的C端加入His-tag,而已经加上了终止子,则无法通过常规克隆方法来加入His-tag。但是,可以通过合成基因的方式来加入His-tag。

        合成基因的方法可以利用化学合成技术来生成需要的DNA序列。一般而言,商业合成基因服务提供商可以为您合成包含His-tag的目的基因序列,并在DNA序列的末端添加正确的限制酶切位点,以便您可以将合成的基因克隆到质粒中。

        另外,如果您已经构建了缺少His-tag的质粒,并且想要通过合成基因来添加His-tag,可以使用PCR引物来扩增目的基因的C端,并在引物中添加His-tag序列,然后将扩增产物克隆到您的质粒中。需要注意的是,这种方法需要仔细设计引物,以确保扩增产物具有正确的长度和序列,并且添加的His-tag序列与目的基因C端的氨基酸序列相容。

        user-title

        idiotOC0Puser-title

        谢谢您详细的回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以通过合成基因的方式后续添加,注意好定位就好了。

        user-title

        idiotOC0Puser-title

        注意定位的话,需要注意哪些坑呢。有无准则可以参考呢,谢谢

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