实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问生信分析是选GO&Kegg还是GSEA？

loveliufudan

选择何种生物信息学分析方法需要根据实验设计和分析目的来决定。对于基因表达谱芯片数据的分析，可以采用GO&KEGG和GSEA等方法，以探究差异表达基因的生物学功能和通路。以下是一些参考建议：如果你感兴趣的是差异表达基因的生物学功能和通路，那么GO&KEGG分析可以是一个好的选择。你可以使用一些生物信息学工具，如DAVID、Enrichr等，对差异表达基因进行功能注释和通路富集分析。这

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问Uuo模型的假手术组是在假手术后1天处死还是第14天？

土井挞克树

Uuo模型的假手术组是在假手术后14天和28天处死

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问请问眼眶取血后出现鼻孔出血，老鼠误吸是什致死，是手法不对?位置扎太深了吗?

loveliufudan

鼻孔出血可能是因为手法不当或者位置扎得太深引起的。在进行眼眶取血时，应该选择合适的针头和注射器，并仔细选择取血位置。取血时需要使用适当的力度，以避免损伤周围的组织，同时确保可以顺利获取所需的血液样品。如果手法不当，针头过深穿透鼻腔后可能会刺激到鼻黏膜，导致鼻孔出血。此外，取血时应该避免扭动针头，以免造成血管和组织的损伤。误吸也可能是导致小鼠死亡的原因之一。在进行任何类型的小鼠操作时，都应该使用正确

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问测MDA时，TBA配置时溶解了，但在4℃保存时又有晶体析出是为什么，会影响测定结果吗？

loveliufudan

如果在TBA配置时发生了溶解，但在保存时又有晶体析出，可能是因为TBA在配制时被过度加热或过度搅拌，导致其在水中溶解度增加，但在降温和停止搅拌后，TBA的溶解度会下降，导致晶体析出。这种晶体可能会影响测定结果，因为它们可能会干扰TBA试剂与其他物质的反应。为了最小化晶体对测定结果的影响，建议您在进行MDA测定之前先过滤掉晶体，以确保测定中只有溶解的TBA试剂。另外，请确保在TBA配制过程中避免过度

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问小鼠下丘脑RNA提取可以做吗？

loveliufudan

可以的。下丘脑是大脑的一部分，其中包含许多重要的神经元和神经递质，因此从小鼠下丘脑中提取RNA可以用于分析基因表达和信号通路的研究。RNA提取的方法可以根据实验室的具体需求而定，例如使用商业RNA提取试剂盒或自制试剂盒，根据实验室的设备和技术水平选择合适的方法。需要注意的是，在取样、提取和储存RNA过程中，应避免RNA降解和污染，以保证实验的准确性和可靠性。

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问蛋白挂柱洗脱不下来请问怎么处理

loveliufudan

以下是可能的解决方案：尝试调整醋酸钠的浓度和NaCl的浓度：您可以尝试减少NaCl的浓度，例如使用250mM NaCl或更低的浓度进行洗脱。另外，您可以尝试增加醋酸钠的浓度，例如使用100mM或更高的浓度。如果您的试剂可以承受更高的醋酸浓度，您还可以尝试使用更高浓度的醋酸（例如0.2 M或更高）。尝试调整洗脱缓冲液的pH：您可以尝试在不同的pH值下进行洗脱。除了pH4，您还可以尝试pH3或更低的条

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问DnsCl衍生时，连接伯胺的C原子上需要有H吗

loveliufudan

在进行DNS-Cl（2,4-二硝基氯苯）的化学反应时，连接到伯胺的C原子上通常需要有氢。因为DNS-Cl与氨基（-NH2）反应时，会发生亲核取代反应，生成DNS-NH-C的结构。在这个反应中，DNS-Cl的NO2基将取代C原子上的氢，形成DNS-NH-C结构。至于连接在C=N键上的C的伯胺是否可以被衍生，这取决于衍生试剂的反应性和它们对于C=N键的亲核或电子亲和性。一般来说，C=N键上的碳原子较为

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问如何进行抗原表位筛选？

loveliufudan

对于筛选T/B细胞抗原表位的问题，以下是一些常用的软件和方法：IEDB（The Immune Epitope Database）：IEDB是一个公共数据库，收集了人类和其他物种中已知的T/B细胞表位信息。可以使用该数据库中的工具进行序列分析和抗原表位预测。可以使用IEDB中的线性和非线性预测工具，例如BepiPred、NetMHC、NetCTL等。DiscoTope：DiscoTope是一个基于机

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问载体双酶切胶回收后能在-20摄氏度保存多久呢

loveliufudan

双酶切胶回收后的DNA样品可以在-20摄氏度长期保存，通常可保存6个月至1年。存储时需要注意以下几点：使用无菌的冷冻保存管保存样品，并确保样品在保存管中完全干燥。在保存之前，检查样品的纯度和浓度，以确保其符合您的实验要求。避免反复冻融样品，因为这会降低DNA的质量和纯度。在保存过程中定期检查样品的质量和纯度，以确保样品适用于后续实验。需要注意的是，对于一些敏感的DNA样品，如RNA或者低浓度的DN

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问Gateway反应的引物是怎么设计的？需要加上attB这个没看懂

loveliufudan

在Gateway克隆技术中，attB位点是重要的克隆元件，它位于载体和DNA片段之间，是介导DNA片段定向插入载体的关键元素。因此，在进行Gateway反应时，需要使用含有attB位点的引物，以引导目标DNA的定向克隆。通常情况下，引物设计可以遵循以下步骤：根据目标DNA片段的序列，选择包含attB位点序列的引物。这些引物通常被称为Gateway入口引物或attB引物。设计引物时需要考虑attB位

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问WB条带中间好像有一个大印子是什么原因啊

loveliufudan

这可能是由于以下原因之一：过度曝光：当暴露时间过长时，较暗的条带会变得更暗，并且可以出现一个大的印子。这通常可以通过优化暴露时间来避免。过量的蛋白质加载：如果在Western blot中加载了过多的蛋白质，可能会导致印子变大或模糊不清。尝试减少样品中的蛋白质浓度或者优化Western blot实验的条件。不均匀的转印：如果转印膜的转印效率不均匀，则可能会出现大的印子。确保均匀地转印蛋白质样品可以避

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问pAT03-Apr是什么特性？重组酶表达质粒

loveliufudan

pAT03-Apr是一种重组质粒，可用于大肠杆菌中表达重组酶。该质粒包含多个重要元件，包括：起始子和终止子：用于启动和终止转录过程。多克隆位点：用于方便地插入目标基因的DNA序列。T7启动子：用于诱导T7 RNA聚合酶的表达。带有6个组氨酸标签（6xHis-tag）的启动子和终止子：用于方便地将重组蛋白纯化。胰凝乳蛋白酶切位点：用于释放表达的重组蛋白。因此，pAT03-Apr质粒可以方便地克隆目标

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问请问长链饱和脂肪酸给小鼠灌胃用什么溶剂溶解

loveliufudan

长链饱和脂肪酸可以选择在灌胃过程中与溶剂混合，以提高其溶解度和生物利用率。一般可以使用一些有机溶剂来溶解长链饱和脂肪酸，如氯仿、甲醇、乙醇、二甲亚砜等。在选择溶剂时，需要注意该溶剂对小鼠的毒性和耐受性。以氯仿为例，可以使用以下步骤将长链饱和脂肪酸与溶剂混合：将适量的氯仿加入容器中，并在磁力搅拌器上搅拌。逐渐加入所需的长链饱和脂肪酸，并不断搅拌，直到完全溶解。将混合溶液放置一段时间，直至完全均匀。使

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问cDNA的保持时间和温度？

huarenqiang5

由RNA逆转录而得到的cDNA在-20°℃一般可以保存2个月左右。

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问大鼠盆神经

loveliufudan

在解剖上，大鼠盆腔神经位于大腿内侧和尾部附近的盆腔区域。具体来说，可以在大腿内侧股沟的上方或者在尾部底部找到盆腔神经。

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问肠道厌氧菌复苏

sswei

控制好氧化还原电势低的条件是肠道厌氧菌复苏的关健。

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问提取甘油菌质粒的时候，用错了培养基有何影响

loveliufudan

使用LB培养基提取甘油菌质粒相对于使用2xYT培养基，可能会对质粒数量和质量产生一定的影响，但具体影响的大小会受到多种因素的影响，如培养时间、培养温度、细胞密度等等。一般来说，2xYT培养基比LB培养基营养更丰富，支持细胞生长和代谢的能力更强，因此使用2xYT培养基培养甘油菌会产生更多的细胞和质粒，且质粒更加稳定，得到的质量也相对更高。而使用LB培养基可能会导致细胞生长缓慢，产量较低，质粒含量和质

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问各位大神救助，这是否为细胞污染，特别重要的细胞！！！

豆豆是个豆

可能也不是污染，可能是死细胞团块，细胞不断增殖不断有状态不好的细胞就会有更多的团块，但是也不排除是污染，保险起见你可以增加双抗的浓度，加到2%以上，PBS里也可以加些双抗，养段时间看着差不多了再把双抗浓度降下来就好。细胞状态还好就有补救的机会！加油！

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问卡方检验结果提示是常量，无法计算统计量，这种应该如何描述卡方值和P值？

sswei

对于这种情况，一是改变变量，如非双改其它或加大样本量，二是更改统计方法，改Fisher精确概率法。

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问QTL在染色体上的定位图

sswei

按照图例，外区间在1.3一18.6，内区间在7.9一12.3。

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