实验问答

21,998,426 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问样品寄送过程,哪些需要低温?哪些需要干冰?哪些常温就可以?

百泰派克-李工

样品寄送的温度要求主要取决于样品的性质。下面是一些常见的样品类型及其相应的温度要求：1.生物样品（如血液、细胞、组织）：这些样品通常需要在低温下运输，以防止细胞活性的丧失或分解。它们通常需要干冰或者液氮来保持低温。2.化学试剂：某些化学试剂在常温下可能会分解或反应，因此需要低温保存。根据试剂的具体性质，可能需要干冰或冷藏。3.药品和疫苗：许多药品和疫苗对温度敏感，需要在冷藏（2-8°C）或冷冻条件

1 回答980 围观

问WB配上样体系怎么配呀

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中的上样体系（Loading Buffer 或 Sample Buffer）通常包含几个关键成分：制备和使用方法：将以上成分按比例混合。可以根据需要调整总体积。通常将上样体系与样品按一定比例混合（例如1:1或1:3），然后在沸水浴中加热5-10分钟进行变性。加热后让样品在室温冷却片刻，然后加载到SDS-PAGE凝胶槽中进行电泳。

1 回答415 围观

问wb在转膜过程中电压如果过低会导致什么结果

百泰派克-李工

1.转移效率低下：电压是推动膜材料从一个表面转移到另一个表面的驱动力。如果电压太低，可能不足以有效地完成这个过程，导致转移效率降低。2.不均匀的转移：由于电压不足，膜材料可能无法均匀地转移，这可能导致转移后的膜出现厚薄不一、缺陷或瑕疵等问题。3.膜质量差：膜的完整性和均匀性对于其性能至关重要。电压过低可能导致膜的质量不佳，从而影响其最终的应用性能。4.时间延长：在某些情况下，如果电压太低，可能需要

1 回答370 围观

问拿到蛋白质组数据后，应该怎么分析，里面什么都有，我要做的是什么？

百泰派克-李工

拿到蛋白质组学数据后，您可以进行一系列分析来提取有意义的生物学信息。蛋白质组学数据分析的步骤和具体目标可能会根据您的研究目的和数据类型（如质谱数据、蛋白芯片数据等）而有所不同。1.质量控制：检查数据质量，确保没有技术误差。2.蛋白鉴定：使用质谱软件与蛋白质数据库匹配，鉴定样本中的蛋白质。3.定量分析：如果涉及比较，进行蛋白质表达水平的定量分析。4.差异表达分析：识别在不同条件或处理组之间表达差异显

1 回答350 围观

问hplc怎么将游离氨基酸和结合氨基酸分开测定

百泰派克-李工

高效液相色谱（HPLC）分离游离氨基酸和结合氨基酸主要是基于它们在分子大小、溶解性和亲疏水性等方面的差异。游离氨基酸是单个的小分子，而结合氨基酸通常存在于蛋白质或多肽中，这些大分子在大小和形态上与游离氨基酸有显著差异。这使得它们在色谱柱中的行为不同。大分子在色谱柱中的洗脱时间比小分子短，因此结合氨基酸比游离氨基酸先洗脱出来，根据收集的保留时间和峰形即可对游离氨基酸和结合氨基酸进行识别和量化。

1 回答436 围观

问WB条带周围一圈浅，中间黑是什么原

百泰派克-李工

WB（Western Blot）条带周围浅色而中间较黑的现象通常是由于蛋白质过载或者检测过敏所致。当样品中蛋白质含量过高，超出了膜的结合能力或者检测系统的线性范围时，就可能出现中间较黑而边缘较浅的条带。这种情况下，中心部分的蛋白质过多，导致抗体饱和，而边缘处蛋白质相对较少，抗体结合不饱和，因此显色反应在中心更为显著。为避免这种情况，可以尝试以下方法：1.稀释样品：减少加载的蛋白质量。2.优化抗体浓

2 回答898 围观

问求助，小肠蛋白应该怎么提取？想检测小肠zo1表达水平，应该取小肠哪一部分合适？

百泰派克-李工

一、蛋白质提取1、样品制备将选定的小肠部分从实验动物中切除，并立即放入冷的生理盐水中以清洗掉残留的内容物。2.组织均质化3.离心将均质物通过离心分离，以去除未破碎的细胞和组织碎片。通常在4°C下高速离心约10-15分钟。4.蛋白质浓缩和纯化收集含有蛋白质的上清液。此时，可以使用盐沉淀、透析或蛋白质纯化柱等方法进一步纯化和浓缩蛋白质。将提取的蛋白质在适当的条件下存储，如-80°C冰箱中，以防止蛋白质

1 回答537 围观

问两个蛋白有互作，加到缓冲液里共同孵育，缓冲液：蛋白1：蛋白2的体积配比应该是多少

百泰派克-李工

两个蛋白质进行相互作用实验时，缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素，包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度，以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。一、配比的选择：一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质，即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如，如果两个蛋白质的分子量相似，可以尝试按体积1:1混合。然而，根据两蛋白之间的互作类型和亲和力，可能需要调整这个比例。对于低亲和力的互作，可能

1 回答197 围观

问SDS-PAGE电泳marker背景相比于样品背景更加透明，脱色脱的更干净是什么原因

百泰派克-李工

SDS-PAGE电泳中marker（标记物）背景比样品背景更透明、脱色更干净主要是由于：1.蛋白浓度差异：Marker通常是纯化的蛋白，浓度较低，而样品中的蛋白可能浓度较高。高浓度蛋白在电泳后更难脱色。2.样品的其他成分：样品中除了蛋白质外，还可能含有影响染色和脱色的其他成分，如脂质、核酸或其他小分子，这些成分可能会影响染料的吸附和释放。3.蛋白质组成差异：样品中可能含有一些与染料有较强亲和力的蛋

1 回答565 围观

问蛋白质组学里面检索数据库要怎么选择？

百泰派克-李工

蛋白质组学研究中选择合适的蛋白质数据库是关键一步，因为它直接影响到质谱数据的解析和鉴定的准确性。一些常用的蛋白质数据库及其适用情形如下：1.UniProt (Universal Protein Resource)：这是最全面的蛋白质数据库之一，包含了大量物种的蛋白质序列信息。适用于多种物种的蛋白质组研究，特别是那些已经有较完善基因组注释的物种。2.NCBI RefSeq (Reference Se

1 回答365 围观

问wb蛋白鉴别实验凝胶脱色后 marker泳道相比于样品泳道背景更透明

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 蛋白鉴别实验中，凝胶脱色后发现marker泳道相比于样品泳道背景更透明，是实验过程中常见的现象，通常是由几个因素造成的：1.蛋白质浓度差异：样品中的蛋白质浓度可能远高于marker。在染色和脱色过程中，高浓度的蛋白质可能导致更强的染色，相应地，在脱色时也更难以完全去除染料。2.蛋白质组成差异：样品中的蛋白质可能与染料有更强的亲和力，或者样品中含有某些染料难以去

1 回答211 围观

问蛋白纯化时，老是挂不上柱子是为什么呢？

百泰派克-李工

在蛋白纯化过程中，如果蛋白质不能有效地吸附到柱子上，可能有几个原因：1.缓冲液pH不适宜：蛋白质的结合通常取决于其等电点和缓冲液的pH。如果pH不适宜，蛋白质可能无法正确结合。2.盐浓度过高或过低：盐浓度会影响蛋白质的溶解度和结合能力。如果盐浓度不适宜，可能会阻碍蛋白质的吸附。3.柱子的问题：柱子可能被堵塞或者失活。需要检查柱子是否正确存储和维护。4.蛋白质的特性：有些蛋白质可能因为其特殊的物理或

1 回答1115 围观

问WB肠组织蛋白提取上清黄色正常吗？

百泰派克-李工

在Western Blot（WB）实验中，肠组织蛋白提取的上清呈现黄色是正常的情况。这种黄色通常来源于组织中的胆汁色素，这些色素可以使蛋白提取液呈现黄色。然而，需要注意的是，样品的颜色并不直接影响Western Blot实验的结果，更重要的是确保蛋白提取和浓度测定的正确性。如果有其他异常现象或者实验结果不理想，可以考虑检查提取步骤和使用的试剂。

1 回答430 围观

问兔多抗用溴化氢琼脂糖凝胶纯化没有成功是什么原因？一般怎么验证抗原偶联上了？

百泰派克-李工

使用溴化氢琼脂糖凝胶纯化兔多抗失败可能有多方面的原因，比如：1.凝胶本身的问题：凝胶的特性可能不适合所用的抗原或抗体，不同的凝胶有不同的孔隙大小和亲和力特性，确保使用的琼脂糖凝胶适合于你的实验。2.偶联效率低合：如果抗原和载体（如琼脂糖珠）的偶联效率不高，可能导致目标抗体的亲和力不足。3.洗脱条件：洗脱条件（如pH、盐浓度）可能不适宜，导致抗体不能有效从凝胶中洗脱出来。调整洗脱液的pH值或盐浓度可

1 回答155 围观

问请问，WB电泳的时候，蛋白的上样量为什么是20ug-30ug，蛋白量过多过少会怎么样？蛋白上样量是与WB的测定目的有关吗？

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中，蛋白的上样量通常建议在20μg-30μg之间，因为这个量级通常能保证足够的蛋白量以获得清晰的条带，同时又不至于过多导致信号饱和或条带模糊。如果蛋白量过多，可能导致信号过强、条带模糊，甚至可能出现条带堆积的现象；如果蛋白量过少，则可能导致信号弱，难以检测到目标蛋白。此外，蛋白上样量也与WB的具体测定目的有关。例如，当研究低丰度蛋白或进行定量分析时，可能需要调整

9 回答7210 围观

问转膜过程前，为什么需要用转膜缓冲液浸泡膜啊？

百泰派克-李工

在转膜过程中使用转膜缓冲液浸泡膜是出于几个关键原因：1.膜的活化：某些膜材料，如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯（PVDF），需要通过缓冲液活化以提高其亲和力，确保蛋白质有效地从凝胶转移到膜上。2.防止干燥：保持膜的湿润状态防止在转膜过程中干燥，干燥的膜可能导致蛋白质转移不均匀或效率降低。3.维持pH和离子强度：缓冲液有助于维持适宜的pH和离子强度，这对于蛋白质的稳定性和转移效率非常重要。4.减少背景噪音：

5 回答507 围观

问有没有大佬知道WB出现这种过曝光的条带是为什么啊？有什么解决办法吗？

静心观照

原因：中心部位高浓度HRP把底物消耗过快，中间部位底物消耗结束之后就不发光了解决办法：降低蛋白量，降低一抗和二抗的浓度。补救措施：可以调整一下曝光时间，在底物消耗完之前完成显影。最好还是从降低蛋白量，降低一抗二抗浓度入手。

5 回答4266 围观

问请问中药颗粒细胞给药，颗粒要怎么溶解啊？是溶于水还是溶于无血清培养基还是dmso呢？

loveliufudan

关于中药颗粒给细胞实验的溶解方法和用量,建议如下:1. 中药颗粒最好先溶解在无血清培养基或浓度适中的DMSO中,然后再稀释至工作浓度。直接溶于水效果不佳。2. 溶解用的无血清培养基要去掉菌,防止污染。DMSO要制成无水的稀释物。3. 溶解浓度根据颗粒性质而定,一般选择0.1-1 mg/ml的范围,完全溶解。超声波功率可提高溶解度。4. 工作浓度根据实验目的在10-500 μg/ml范围确定,需要先

5 回答1049 围观

问frontiers投稿要求重新提交稿件是什么意思啊

dxy_7hjrvxgq

您好，我也遇到了同样的问题，我想问您最后解决了吗？是什么原因呢？谢谢

5 回答1573 围观

问爱思唯尔投稿Decision in process状态

514舍长

请问您最后怎么样？我也是这个，感觉大概率悲剧

4 回答3228 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序